[发明专利]一种检测纤维二糖脱氢酶活性的方法

权利要求书

1.一种检测纤维二糖脱氢酶活性的方法，包括以下步骤：

（1）纳米金颗粒的制备：取HAuCl₄水溶液加热搅拌至沸腾，然后边搅拌边加入柠檬酸钠溶液，直至混合溶液颜色转为清亮橘红色后停止加热，继续搅拌，室温冷却，得含纳米金颗粒的溶液；

（2）检测体系的制备：将上述含纳米金颗粒的溶液加入到缓冲溶液中，再加入纤维二糖溶液、氯金酸溶液和表面活性剂溶液，调节混合溶液中各组分的浓度，使所述纳米金颗粒、纤维二糖在混合溶液中的浓度分别控制在0.3nM～0.4nM和0.4 mM～0.5mM，配得检测体系；

（3）酶活测定：将待测溶液按照1∶（4.5～5.5）的体积比添加到所述的检测体系中，混合均匀，待充分反应完全后，用紫外可见分光光度计对反应后的产物体系进行光谱扫描，测得产物体系中纳米金颗粒的表面等离子体共振吸收峰强度，再根据测得的表面等离子体共振吸收峰强度数值和已经建立的线性回归方程，得到待测溶液中纤维二糖脱氢酶的酶活。

2.根据权利要求1所述的检测纤维二糖脱氢酶活性的方法，其特征在于：所述检测体系中，所述纤维二糖、氯金酸和纳米金的摩尔比为（2～2.5）∶1∶（1.5×10^-6～2×10^-6）。

3.根据权利要求1所述的检测纤维二糖脱氢酶活性的方法，其特征在于，所述酶活测定步骤中，所述反应的测定条件为：反应温度控制在30℃～37℃，反应pH值为4.5～5.0，反应时间为10min～15min。

4.根据权利要求1所述的检测纤维二糖脱氢酶活性的方法，其特征在于，所述表面活性剂为十六烷基三甲基氯化铵。

5.根据权利要求1～4中任一项所述的检测纤维二糖脱氢酶活性的方法，其特征在于，所述待测溶液为黄孢原毛平革菌培养后产出的粗酶液。

6.根据权利要求5所述的检测纤维二糖脱氢酶活性的方法，其特征在于：所述线性回归方程为A=0.0349x+0.5793，其中，A为测得的表面等离子体共振吸收峰强度数值，x为所述待测溶液中含有的纤维二糖脱氢酶的酶活，单位为U/L。

7.根据权利要求6所述的检测纤维二糖脱氢酶活性的方法，其特征在于：所述待测溶液中纤维二糖脱氢酶酶活的检测范围为1.3 U/L～9.5U/L。

8.根据权利要求1～4中任一项所述的检测纤维二糖脱氢酶活性的方法，其特征在于：所述待测溶液中纤维二糖脱氢酶酶活的检测范围为1.3 U/L～9.5U/L。