[发明专利]一种用脂质体技术筛选乳杆菌冻干用保护剂的方法

权利要求书

1.一种β-半乳糖苷酶脂质体。其特征是含有β-半乳糖苷酶为活性成分和脂质体的制备材料大豆卵磷脂、十八胺。

2.按权利要求1所述的酶脂质体的基本特征为：脂质体平均粒径：110nm～150nm，分散性指数(PdI)：0.265～0.390，Zeta电位：-37.1～-42.0mV。

3.按权利要求1所述的酶脂质体，其制备方法及步骤为：

①称取大豆卵磷脂和十八胺按摩尔比10∶1，共144μmol，溶于15ml乙醚中

②吸取5mlβ-半乳糖苷酶酶液，其蛋白质浓度为1.286mg/ml，酶的比活力为1970U/mg蛋白质，加入①中混匀。水浴超声3min，每处理30s，间歇30s，使之成为油包水型，即W/O型乳液

③旋转蒸发，除去有机溶剂

④加入外水相。加入磷酸钠缓冲液(20mM，pH7.0)30ml，继续旋转直至白色悬液形成

⑤超声破碎仪匀化粒径。超声功率为80％，超声时间为5min×2，至形成透亮的溶液。

4.按权利要求1所述的酶脂质体，其冷冻干燥方法为：

制备的脂质体悬液，液面高度0.5-1cm，在-25℃以下预冻12小时；在温度-50-40℃，真空度40-80Pa下真空冷冻干燥12小时。

5.按权利要求1所述酶脂质体，利用其筛选乳杆菌冷冻干燥保护剂的方法及步骤为：

(1)β-半乳糖苷酶脂质体的制备

(2)脂质体与游离β-半乳糖苷酶的分离以及测定脂质体包封率

(3)添加不同冷冻干燥保护剂后对脂质体进行冷冻干燥

(4)冻干脂质体复水与游离β-半乳糖苷酶分离以及测定脂质体包封率

(5)乳酸菌培养及测定胞内乳糖酶酶活力保存率

(6)添加利用脂质体技术筛选出的冷冻干燥保护剂后对乳酸菌进行冷冻干燥

(7)冻干乳杆菌菌粉复水及测定胞内乳糖酶酶活力保存率。