[发明专利]一种人MMP-14抗原、相应单克隆抗体及其应用

说明书

技术领域

本发明属于免疫学技术领域，具体涉及一种人MMP-14抗原、相应单克隆抗体及其应用。

背景技术

细胞外基质(Extracellular matrix ECM)对维持细胞生长分化所需要的环境起着重要作用。基质金属蛋白酶 (matrix metalloproteinases,MMPs)是一个蛋白超家族，其依赖锌离子而发挥降解细胞外基质作用。

在1962年Jerome Gross和Charles Lapiere在观察蝌蚪尾巴蜕变过程中发现有一种酶能降解胶原酶，所以他们就把这种酶命名为胶原酶也就是MMP-1。目前在脊椎动物共发现24种不同的基质金属蛋白酶，其中23种在人体中存在。

基质金属蛋白酶家族成员具有相似的结构，一般由5个功能不同的结构域组成：前肽区，催化域，铰链区，类血红素结合蛋白区。（1）疏水信号肽序列，主要作用是保持酶原的稳定。当该区域被外源性酶切断后，MMPs酶原被激活;（3）催化活性区，有锌离子结合位点，对酶催化作用的发挥至关重要;（4）富含脯氨酸的铰链区;（5）羧基末端区，与酶的底物特异性有关。其中酶催化活性区和前肽区具有高度保守性。MMPs成员上述结构的基础上各有特点。各种MMP间具有一定的底物特异性，但不是绝对的。同一种MMP可降解多种细胞外基质成份，而某一种细胞外基质成分又可被多种MMP降解，但不同酶的降解效率可不同。

基质金属蛋白酶几乎能降解细胞外基质中的各种蛋白成分,破坏肿瘤细胞侵袭的组织学屏障，在肿瘤侵袭转移中起关键性作用，被认为是该过程中主要的蛋白水解酶。其中MMP-14是与肿瘤侵袭关系最密切的酶，而且是在该蛋白酶家族中最具肿瘤特异性的蛋白。

MMP-14也称膜型基质金属蛋白酶I（MT1-MMP），不但高表达于肿瘤相关成纤维细胞上，还高表达于肿瘤细胞和肿瘤血管内皮细胞上，具有以下特点：

（1）MMP-14在多种肿瘤组织中高表达：如乳腺癌，小细胞肺癌、膀胱癌、卵巢癌、食管癌、头颈部肿瘤等，而在正常组织几乎不表达；

（2）MMP-14与肿瘤生长和转移密切相关：MMP-14不仅可直接降解细胞外基质，而且可以通过切割MMP-2前体而激活MMP-2，活化的MMP-2是降解Ⅳ型胶原的主要酶，在肿瘤细胞的浸润转移灶的形成以及瘤组织内新生血管的形成中均起重要作用；

（3）MMP-14促进肿瘤血管新生：MMP-14通过上调血管内皮生长因子VEGF，碱性成纤维细胞生长因子bFGF，以及通过与整合素aVβ3共同发挥作用，促进肿瘤血管生成。

（4）临床证实MMP-14与肿瘤的预后和转移相关：如在乳腺癌患者中，MMP-14的表达水平越高，预后越差、肿瘤体积越大，淋巴结转移易常见。所以，以MMP-14作为肿瘤治疗的靶分子，也具有适用于大多数实体肿瘤的通用性。

综上所述，由于MMP-14在多种肿瘤组织中高表达并与肿瘤生长和转移密切相关等原因，开展对MMP-14的体外检测对肿瘤的诊断及治疗具有重要意义，MMP-14的单克隆抗原及抗体的成功研制对实现MMP-14的快速、准确、特异性的检测具有决定性的作用。目前，尚未见相关MMP-14的单克隆抗原及抗体等的技术报道。

发明内容

本发明的目的在于针对现有技术的上述不足，提供一种人MMP-14抗原、相应杂交瘤细胞株及其单克隆抗体和应用。

本发明通过以下技术方案实现上述目的：

一种人MMP-14抗原，氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示（氨基酸序列简写为：REVPYAYIREGHEKQA）。

一株杂交瘤细胞株92F11A，是由上述人MMP-14多肽制备得到的，于2011年8月15日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心（地址北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所），保藏编号CGMCC No.5080。

上述杂交瘤细胞株92F11A的制备方法，步骤如下：

（1）用人MMP-14抗原与血蓝蛋白偶联作为抗原免疫小鼠；

（2）取免疫后小鼠的脾脏细胞，与骨髓瘤细胞SP2/0进行细胞融合；

（3）融合细胞用ELISA法筛选阳性克隆，得到杂交瘤细胞株92F11A。

一种人MMP-14单克隆抗体，是由所述杂交瘤细胞株92F11A分泌所得的，能特异结合SEQ ID NO:1所示的抗原多肽，其抗体亚型为IgM型。