[发明专利]一种含有人参皂苷类成分药材及制剂指纹图谱的建立方法

说明书

 

技术领域

本发明属于中药材及其提取物制剂的质量控制方法技术领域，进一步讲是提供一种含有人参皂苷类成分药材及其提取物制成制剂的指纹图谱，涉及西洋参、西洋参茎叶、人参、人参茎叶、三七、三七茎叶药材及其提取物制成制剂的超高效液相色谱指纹图谱的构建方法和标准指纹图谱。

背景技术

本发明涉及的含有人参皂苷类成分药材及制剂包括：西洋参、西洋参茎叶、人参、人参茎叶、三七、三七茎叶药材及其提取物制成制剂的一种或多种混合物。

目前，对于含有人参皂苷类成分药材及其提取物制成制剂的质量控制主要采用高效液相色谱法(High Performance Liquid Chromatography, HPLC)进行研究，但由于它们的主要成分三萜皂苷，例如：人参皂苷Rg₁和Re、人参皂苷Rb₂和Rb₃等，在HPLC上难以达到基线分离，要达到较好的分离，往往需要很长的分析时间，通常需要1~2个小时；此外，西洋参茎叶药材及其原料和制剂中含有的部分三萜皂苷，如拟人参皂苷F₁₁，不具有紫外吸收，且含量较高，具有较好药理活性，常用的紫外(UV)、二极管阵列检测器(DAD)等无法检测到这类物质，因此，存在特征性成分分析不全面、不能从整体上对西洋参和西洋参茎叶等含有人参皂苷类成分药材及其提取物制剂进行质量控制的缺欠。因此针对西洋参、西洋参茎叶、人参、人参茎叶、三七、三七茎叶等药材及其制成的中药原料药和中药制剂质量控制方法有待进一步完善。

发明内容

本发明目的是提供一种含有人参皂苷类成分药材及其提取物制成制剂的指纹图谱，通过超高效液相色谱与蒸发光检测器联用新技术，建立一种含有人参皂苷类成分药材及其提取物制成制剂的UPLC-ELSD指纹图谱的方法，并由此得到西洋参、西洋参茎叶、人参、人参茎叶、三七、三七茎叶等药材及其提取物制成制剂的共有模式的分析鉴别方法。

为达到本发明的目的所采用的技术方案：用超高效液相色谱法联合蒸发光检测器新技术建立人参、西洋参、三七系列药用部位及其提取物制成制剂指纹图谱的方法，具体包括如下步骤：

1）供试品溶液的制备：

称取待测药材0.1~2 g，加氯仿0~100 ml，加热回流0~3小时，弃去氯仿液，药渣挥尽氯仿，20~100 ml水或甲醇或正丁醇提取后，挥尽溶剂，加水5~50 ml使溶解，加石油醚（30~60℃）5-50 ml提取1-4次，弃去石油醚液，水液通过大孔吸附树脂柱，以水50~100 ml、20%乙醇50~100 ml和70%~80%乙醇70~200 ml顺序洗脱，收集70%~80%乙醇洗脱液，蒸干，残渣加甲醇溶解，置5~50 ml容量瓶中定容，滤膜过滤，即得供试品溶液；

2）参照物溶液的制备：

分别取人参皂苷Re、拟人参皂苷F₁₁、人参皂苷Rb₂、人参皂苷Rb₃、人参皂苷Rd中的一种或多种，用甲醇溶解，制成每1 ml含包括人参皂苷Re、拟人参皂苷F₁₁、人参皂苷Rb₂、人参皂苷Rb₃、人参皂苷Rd中的一种或多种0.1~1.0 mg的溶液，滤膜过滤，作为参照物溶液；

3）色谱条件：

采用超高效液相色谱仪和蒸发光散射检测器联用技术（简称：UPLC-ELSD），以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，色谱柱填料粒径1.5 μm~3.5 μm，柱温20~60 ℃；流动相：以乙腈为流动相A，以水为流动相B，梯度洗脱，梯度如下；

其中0分钟~8分钟时，流动相A为19%~20%的乙腈、流动相B为81%~80%的水；

8分钟~9分钟时，流动相A为20%~24%的乙腈、流动相B为80%~76%的水；

9分钟~19分钟时，流动相A为24%~31%的乙腈、流动相B为76-69%的水；

19分钟~21分钟时，流动相A为31%~35%的乙腈、流动相B为69%~65%的水；

21分钟~23分钟时，流动相A为35~36%的乙腈、流动相B为65~64%的水；

23分钟~25分钟时，流动相A为36~40%的乙腈、流动相B为64~60%的水；

25分钟~28分钟时，流动相A为40~55%的乙腈、流动相B为60~45%的水；

28分钟~28.5分钟时，流动相A为55~19%的乙腈、流动相B为45~81%的水；