[发明专利]一种北方根结线虫LAMP快速检测方法及应用

说明书

技术领域

本发明涉及北方根结线虫LAMP快速检测方法，属于生物技术领域。

背景技术

根结线虫(Meloidogyne spp.)属植物根系专性内寄生线虫，是世界性分布的威胁全球农业生产的重要植物病原线虫之一。迄今己记载的根结线虫有90余种，其中南方根结线虫(M.incognita)、爪哇根结线虫(M.javanica)和花生根结线虫(M.arenaria)和北方根结线虫(M.hapla)是四种常见最重要的根结线虫。

在我国，这四种根结线虫在大多数省(区)均有发生，侵染农作物达百种以上，致使寄主常年减产15～25％，有时达70％以上(徐建华，魏大为，詹裕定和程瑚瑞.江苏省大棚蔬菜寄生线虫的种类和发生.南京农业大学学报，1994，17(1)：47-51).，严重地制约了大棚蔬菜、果树、花卉等作物的生产和出口创汇。据估计，我国农作物的生产每年因根结线虫的为害而遭受的经济损失达数亿元以上。据调查研究，我国分布最广泛、最常见的根结线虫与世界各地类似，包括南方根结线虫(M.incognita)、爪哇根结线虫(M.javanica)、花生根结线虫(M.arenaria)和北方根结线虫(M.hapla)。北方根结线虫是1949年Chitwood在太平洋地区的咖啡树上发现的(Chitwood，B.G.1949.Root-knot nematodes.Part-I.A revision of the genus Meloidogyne Goeldi，1887.Proceedings of the Helminthological Society of Washington 16：90-104.)。

根结线虫的传统鉴定方法主要根据形态学，主要是根据会阴花纹进行鉴定，但由于不同地理种群之间存在较大的变异性导致有时结果不够准确。再者形态特征细微复杂，对专业知识要求高，鉴定过程耗时、费力，且需要大量线虫样本，在单头线虫水平上不能达到要求。

后来发展的同工酶技术能快速准确的鉴定不同的根结线虫，但是它需要有适宜雌虫的存在，因而不适用于多数情况下幼虫和卵的检测。

由于形态学和同工酶技术的局限性，上世纪90年代起开始了根结线虫分子鉴定的研究。目前针对根结线虫的PCR诊断法主要基于rDNA的ITS和IGS序列的rDNA-PCR法，基于mtDNA的mtDNA-PCR-RFLP法，基于RAPD的SCAR-PCR法。