[发明专利]检测人类先天性心脏病TAB2基因2个致病突变位点的试剂盒及其PCR扩增方法

说明书

技术领域

本发明属于生物医学领域中的临床检测技术，涉及对人类先天性心脏病基因致病突变位点的检测方法。

本发明提供一种检测人类先天性心脏病致病基因突变的PCR试剂盒。本发明的内容涉及一种检测先天性心脏病TAB2基因中2个致病突变位点的试剂盒及其PCR扩增方法，该检测结果可用于临床辅助诊断先天性心脏病。

背景技术

先天性心脏病(Congenital Heart Disease)，是小儿先天性畸形中最为常见的一种，严重危害着儿童健康及生命。其发病率由于观察病例数的不同而异，约为0.4％-5％，其中60％于＜1岁死亡。

先天性心脏病发病的类型普遍认为以单纯性室间隔缺损(VSD)和房间隔缺损(ASD)居多。症状表现为心衰，紫绀，蹲踞，肺动脉高压，杵状指(趾)和红细胞增多症，发育障碍等。

引起胎儿心脏发育畸形的原因大致分为外因和内因两类，外在因素主要包括感染性因素，药物因素，环境因素和代谢因素等。内在因素主要与遗传有关，特别是染色体异常和基因突变。随着分子生物医学理论研究与技术的进步以及测序技术的迅猛发展，人们逐渐认识到许多先天性心血管疾病是由于一些基因结构和表达异常引起的，且它们在某些心血管疾病的发生发展中起着重要的作用。近20年来遗传学研究的显著成果之一是基因定位，即能够确定某致病基因在染色体上的特定位置。根据致病的遗传物质不同，及其遗传方式的特点，可将胎儿先天性心脏病分为染色体异常遗传性疾病，单基因遗传性疾病和多基因遗传性疾病等。

1，染色体异常导致的心血管疾病：由染色体数目和结构异常引起，现已发现众多常染色体异常综合征伴心脏畸形，心外畸形为主要表现，但多以综合征形式出现，即累及多器官多系统，且为一般人群中最常见的心脏畸形。有通过《中国人染色体异常核型与畸变研究资料数据库》计算机分析系统进行病例分析，结果表明该数据库中6078种异常核型中有25种染色体异常同时患先天性心脏血管性疾病，占染色体异常核型的0.41％，其中包括染色体数目异常和结构异常。数目异常以三体型较为常见，如18、21三体等。结构畸变主要有：缺失、易位、倒位等，易位较为常见，如2号和3号、2号和5号、4号和5号、3号和7号等。

2，单基因遗传性心血管疾病：基因突变可发生在一对染色体的某一条染色体或一对染色体都发生突变，遗传缺陷的形成往往是单个基因改变所致，发生率仅为1/2000。由于基因的多效性，可在机体的不同部位产生不同效应，因而表现为多种畸形，单基因遗传性疾病其畸形可是孤立的心脏畸形；也可为综合征的一部分，以后者多见。一般认为临床上遇到重大畸形，并伴一个以上的结构异常者应考虑单基因遗传性疾病。

3，多基因遗传性心血管疾病：多基因是指遗传因素和环境因素共同作用产生的某些异常，有明显的家族性，而且同时受环境因素的影响，临床上常见的有房缺、室缺、法洛氏四联征、主动脉狭窄、肺动脉狭窄、完全性大动脉错位等。在这些疾病特别是房缺、室缺的致病基因研究中发现了许多相关基因与发病相关。

由于心脏的发育过程异常复杂，对人类先天性心脏病直接的分子遗传学的研究至今依然存在许多困难。但随着人类基因组计划的飞速发展、克隆技术的逐渐成熟、DNA芯片技术的广泛应用，将逐渐增加我们对遗传性心血管疾病的分子遗传学机制的认识。

2010年，科学家Bernard Thienpont等发现染色体6q24-q25位置与人的先天性心脏病有关，进一步的研究发现，激活TGF-β-激酶1/MAP3K7结合蛋白2基因(TAB2)中的两个错义突变导致了心脏发育不良。这两个位点分别为c.622C＞T，导致第208位的脯氨酸突变成了丝氨酸；c.688C＞A导致第230位的谷氨酰胺突变成赖氨酸。序列比对表明这两个突变都改变了蛋白的高度保守区，而这两个保守区预测都对蛋白功能有不利的影响。

临床上检测先天性心脏病的技术包括对胎儿进行超声心动图检查。在分子生物学水平，20世纪50年代后期开始利用染色体核型分析技术来检测由于染色体异常而导致的先天性心脏病，并成为多发畸形儿遗传学检查的经典方法；荧光原位杂交技术(FISH)对于发现小拷贝基因变化(如缺失或重复)和基因重组更加敏感。

随着分子生物学技术的进步和先天性心脏病致病基因定位的日渐明确，通过聚合酶链式反应(PCR)和基因测序等技术进行分子检测逐渐大行其道，其中，“分子开关”检测突变由于其操作简单、不用测序、成本低廉等优势，成为广泛应用的一项技术。