[发明专利]检测人类先天性心脏病TAB2基因2个致病突变位点的试剂盒及其PCR扩增方法

权利要求书

1.一种检测人类先天性心脏病致病基因突变的PCR试剂盒。其特征在于：所述试剂盒包括检测先天性心脏病TAB2基因中2个致病突变位点C622T和C688A的两组特异性引物中的至少一组及PCR反应mix；

2.根据权利要求1，以人类先天性心脏病TAB2基因致病位点C622T和C688A所在的TAB2基因的第二外显子DNA序列为模板设计引物。其特征在于：针对致病位点C622T所设计的引物对中，正常模板配对引物中上游引物的3’端含有序列CAGTCC或下游引物的3’端含有序列TGTGGA，突变模板配对引物中上游引物的3’端含有序列CAGTTC或下游引物的3’端含有序列TGTGAA；针对致病位点C688A所设计的引物对中，正常模板配对引物中上游引物的3’端含有序列GACACA或下游引物的3’端含有序列TGTTGT，突变模板配对引物中，上游引物的3’端含有序列GACAAA或下游引物的3’端含有序列TGTTTT。其中3’端的-3与-2位碱基之间的磷酸二酯键采用磷硫酰修饰，或将-2位碱基经锁核酸化(LNA)修饰。

3.根据权利要求2，优选的两组特异性引物的序列分别如下所示。

第一组，检测C622T突变位点的引物的碱基序列：

正常模板配对引物C622T N F：5’-TGTACTTAACAGTCC-3’；突变模板配对引物C622T M F：5’-TGTACTTAACAGTTC-3’；共同的下游引物C622TR：5’-GGTTGTGAAGTAGTAG-3’。其中，所述正常模板配对引物C622T N F和突变模板配对引物C622T M F的3’端的-3与-2位碱基之间的磷酸二酯键采用磷硫酰修饰，或将-2位碱基经锁核酸化(LNA)修饰。

第二组，检测C688A突变位点的引物的碱基序列：

正常模板配对引物C688A N F：5’-GTACAACTCGACAGACACA-3’；突变模板配对引物C688A M F：5’-GTACAACTCGACAGACAAA-3’；共同的下游引物C688AR：5’-AGGATGGTGATGAATAAAGG-3’。其中，所述正常模板配对引物C688A N F和突变模板配对引物C688A M F的3’端的-3与-2位碱基之间的磷酸二酯键采用磷硫酰修饰，或将-2位碱基经锁核酸化(LNA)修饰。

4.根据权利要求3，所述正常模板配对引物及突变模板配对引物的3’端的-3与-2位碱基之间的磷酸二酯键采用磷硫酰修饰，或将-2位碱基经锁核酸化(LNA)修饰。

5.一种采用权利要求1和2检测人类先天性心脏病TAB2基因中2个致病突变位点C622T和C688A的PCR扩增方法，其特征在于：

(1)，针对不同突变位点的检测，PCR扩增采用权利要求1所列的两组引物中的至少一组；

(2)PCR扩增由预变性和30-40次扩增温度循环组成，循环条件为95℃预变性10min，94℃变性30sec，55℃退火30sec，72℃延伸30sec，循环30-40次。循环结束后72℃补齐延伸10min后反应结束。