[发明专利]一种从发酵液中提取棘白菌素类化合物的方法

权利要求书

1.一种从棘白菌素类化合物发酵液中提取棘白菌素类化合物的方法，该方法包括以下步骤：

a)采用微滤设备对棘白菌素类化合物发酵液进行错流过滤，得到浓缩的菌丝体悬浮液，然后加入调节至pH＝3.0～8.0的水对菌丝体悬浮液进行清洗，微滤后得到清洗后的菌丝体悬浮液，然后在5℃～50℃温度下加入萃取剂对清洗后的菌丝体悬浮液进行萃取，微滤后得到含有棘白菌素类化合物的滤液；其中，所述萃取剂为第一种溶剂与水的混合溶剂，所述第一种溶剂为甲醇、乙醇、正丙醇、异丙醇或丙酮；

b)用大孔树脂吸附所述滤液中的棘白菌素类化合物，然后用第二种溶剂预洗、解析，得到含有棘白菌素类化合物的解析液；其中，所述大孔吸附树脂为非极性大孔吸附树脂或弱极性大孔吸附树脂，所述第二种溶剂为甲醇、乙醇、正丙醇、异丙醇或丙酮；

c)先用纳滤浓缩所述解析液，继续减压浓缩以除去第二种溶剂；

d)加入第三种溶剂析出棘白菌素类化合物后，得到含有棘白菌素类化合物的固液混合物；其中，所述第三种溶剂为丙酮、乙腈、乙酸乙酯、乙酸异丁酯、乙酸正丁酯、己烷、乙醚或水；以及

e)对所述固液混合物进行过滤，湿粉干燥后得到棘白菌素类化合物干粉。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述棘白菌素类化合物包括肺念菌素B0(Pneumocandin B0)、WF11899A(FR901379)和棘白菌素B(Echinocandin B)。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在步骤a)中，分别使用磷酸、草酸、盐酸或氨水调节水至pH＝3.0～8.0，所述磷酸、草酸、盐酸或氨水浓度均为10wt.％～30wt.％。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在步骤a)中，所述微滤采用陶瓷膜、不锈钢膜、超滤膜中的一种微滤膜过滤、或者陶瓷膜、不锈钢膜、超滤膜中的多种微滤膜串联混合过滤；所述微滤膜为孔径为0.05～0.5μm的陶瓷膜或不锈钢膜、或者截留分子量为30KDalton～3000K Dalton的超滤膜。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在步骤a)中，所述混合溶剂中所述第一种溶剂的体积比例为20％～90％，优选40～60％，更优选20％～50％。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在步骤a)中，在20～40℃温度下加入萃取剂对清洗后的菌丝体悬浮液进行萃取。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在步骤a)中，在用大孔树脂吸附所述滤液中的棘白菌素类化合物前，使用截留分子量为200 Dalton～800 Dalton的纳滤膜进行浓缩，纳滤透过液返回到溶剂萃取步骤中，纳滤浓缩液则进行步骤b)操作。

8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在步骤b)中，所述弱极性大孔吸附树脂为Amberlite XAD-7HP或Diaion SP-207；所述非极性大孔吸附树脂为Amberlite XAD-1180N、AmberliteXAD-1600、Amberlite XAD-2、Amberlite XAD-4、Diaion HP-20、或Diaion SP-825。

9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在步骤b)中，在萃取液经过大孔树脂吸附所述滤液中的棘白菌素类化合物后，大孔树脂吸附废液先用纳滤膜浓缩后，纳滤透过液作为萃取剂，并返回到步骤a)再次循环进行萃取。

10.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在步骤b)中，在大孔树脂进行预洗、解析操作之前，先用水洗树脂柱。

11.根据权利要求10所述的方法，其特征在于，在步骤b)中，在大孔树脂进行预洗操作时，预洗剂为有机溶剂与水的混合溶剂，其中有机溶剂体积比例控制在20％～50％。

12.根据权利要求10所述的方法，其特征在于，在步骤b)中，在大孔树脂进行解析操作时，解析剂为有机溶剂与水的混合溶剂，其中有机溶剂体积比例控制在50％～90％。