[发明专利]口腔螺旋杆菌感染检测方法及用于检测的唾液试板

说明书

技术领域

本发明涉及一种对口腔螺旋杆菌感染进行诊断的检测方法及用于检测的试板，特别涉及联合或单独使用唾液幽门螺旋杆菌抗原法(HPS)、唾液幽门螺杆菌鞭毛抗原检测方法(HPF)对口腔中螺旋杆菌的检测及使用的唾液试板，该检测方法不仅能检测口腔中的螺旋杆菌感染，也同時能检测胃内的螺旋杆菌感染。 

背景技术

幽门螺旋杆菌，Helicobacter pylori，简称HP，是慢性活动性胃炎、消化性溃疡、胃黏膜相关淋巴组织(MALT)淋巴瘤和胃癌的主要致病因素。1994年世界卫生组织/国际癌症研究机构(WHO/IARC)将幽门螺旋杆菌定为I类致癌原。对于HP的传播途径，多数学者认为是通过消化道进行传播的，很多研究结果表明了HP存在通过口-口传播。本发明人认为口腔是HP在人体内除胃部外又一个可能定居场所，即“HP二个定居点”的二点论。定植于口腔中的HP我们称之谓“口源性螺旋杆菌”。口源性定植螺旋杆菌是否存在，曽是国际医学界有争议的大问题。争议的焦点是口腔中发现的HP，是单纯由于胃液反流造成口腔中出现HP，还是口-口、胃-口传播时在口腔定植的HP。定植的HP分布在牙菌斑或牙周组织(如龈袋)中。再从定植于口腔中的HP源源 不断地随唾液吞咽入胃，而在胃内定植。常规治疗胃HP感染有三联疗法(以铋剂、质子泵抑制剂，或雷尼替丁枸橼酸铋为主加上两种抗生素疗法称为三联疗法)，四联疗法(质子泵抑制剂加铋剂联合两种抗生素的疗法称为四联疗法)，序贯疗法(标准的序贯疗法疗程为10天，前5天应用质子泵抑制剂联合阿莫西林，后5天应用质子泵抑制剂联合克拉霉素和替硝唑/甲硝唑)，复合治疗(质子泵抑制剂联合三种抗生素的疗法，目前主要用于HP对抗生素耐药严重地区的补救治疗)。定植于牙菌斑内的HP因抗生素不能有效地穿过这层“生物胶片膜”(biofilm)，致使标准常规治疗胃HP方法对口腔HP感染作用甚微。生物胶片膜是由口腔中已经死去的链球菌菌体，沿着牙齿的表面堆积起来的，经过钙化之后形成的一层生物胶片膜，好像电影胶片膜，质地非常坚固。在生物胶片膜的形成后期，膜内产生酸性物质，这酸性物质通常可被口腔唾液的碱性所中和。但这酸性物质並不能被碱性的唾液所中和后，此時完整的生物胶片膜和唾液完全隔开，酸性物质促使牙齿的表面产生了破洞，最后成为龋齿。危害半数以上人类的螺旋杆菌除了生活在胃幽门、食管外，就躲在这生物胶片膜中，或称牙斑。 

2011年8月举行的第六届全国幽门螺杆菌感染及消化疾病诊治临床论坛报告了一项全国多中心、随机、平行对照研究证明，口腔Hp感染的确存在，口腔Hp感染导致根除治疗失败。造成对口源性螺旋杆菌认识不足或存在误区的主要原因，是目前常用的HP检测技术，难以对口腔中HP做出稳定的检测结果。近年来，在分析HP根除治疗失败原因时，才开始涉及口腔HP感染对胃HP感染的影响问题，对口腔 螺旋杆菌的检测有助于对幽门螺旋杆菌的预防及治疗才提到议事日程上来。 

自1983年通过胃镜取活检标本分离培养成功以来，对幽门螺杆菌感染的诊断已发展出了许多方法，包括有细菌学、病理学、血清学、同位素示踪、分子生物学等。但总的讲来，从标本采集角度看，可以分为侵袭性和非侵袭性两大类。侵入性方法主要指必需通过胃镜取活检标本检查的方法，是目前消化病学科的常规方法。它包括细菌的分离培养和直接涂片、快速尿素酶试验，药敏试验。非侵入性方法主要指不通过胃镜取活检标本诊断幽门螺杆菌标本感染的方法。这类方法包括抗体检测、抗原检测、尿素酶¹³C/¹⁴C呼气试验等。 

1.聚合酶链反应(PCR)：PCR是检测HP最敏感的技术，特异性强，并且对检测标本的要求低，适用于标本中HP含量少，或因含大量正常菌群而降低培养敏感性时HP的检测。因此，对牙菌斑、唾液、牙周病变黏膜刮取物的HP检测常用PCR法。但PCR法因受引物的影响，容易产生假阴性或假阳性；并因PCR对与HP基因结构密切相关的细菌群，可由于交叉反应而出现假阳性。PCR技术要求高，操作复杂，费用亦高，不宜作为口腔HP感染的常规检测。 

2.快速尿素酶试验(RUT)：HP产生的尿素酶可分解尿素产生NH3和CO2，NH3的产生使pH值升高，使胃黏膜组织呈碱性，据此原理通过加入pH指示剂，通过颜色的改变判断有无HP感染的存在。由于口腔中特定的pH呈弱碱性，及口腔复杂的菌群环境，有可能造成假阳性，使RUT法用于口腔HP检测缺乏价值。