[发明专利]食品和饲料中水牛成分的实时荧光PCR检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及分子生物学和核酸检测技术领域。具体地，本发明涉及食品或饲料中水牛成分的实时荧光PCR检测方法和试剂盒。

背景技术

作为一类高级营养食品，水牛奶制品日渐成人们消费的“新宠”，被誉为“奶中之王”。水牛奶、水牛奶酪、水牛奶保健产品和婴儿食品系列产品是高附加值的奶制品，产品价值和营养价值均高于普通牛奶制品数倍。作为商业上极有价值的成分，水牛奶的糖含量、乳蛋白与酪蛋白含量比黄牛奶高，且富含矿物质和微量元素，营养价值高，水牛乳乳香浓稠，风味浓郁、口感饱满，是老少皆宜的营养佳品。水牛奶是地方特色产品。意大利水牛奶业生产水平高，产品种类多，市场大，Mozzarella奶酪世界闻名，深受欧美市场的欢迎。水牛奶酪远销英、法、美等国家和地区，主要在高档餐馆和美食店销售，价值极昂贵。在中国，以广西水牛头数最多，其后依次是云南，广东，贵州，湖北，四川，湖南，江西和安徽。水牛奶加工的产品为姜撞奶、双皮奶等。因为水牛奶产量不高，并且价格较贵，所以目前在水牛奶及制品中掺入普通牛奶的现象很普遍。

目前关于乳制品掺假的检测方法有电泳、色谱、免疫化学、DNA技术等，以DNA为基础的PCR等方法通过对DNA扩增进行乳品种的分析，灵敏、特异、简便、快速、稳定性好。但是，目前还没有检测效果良好的特异性检测水牛成分的试剂和方法。

发明内容

本发明的目的在于提供食品或饲料中水牛成分的实时荧光PCR检测方法和试剂盒。

在本发明的第一方面，提供一种鉴定水牛成分的方法，所述方法包括：

以待测样品的DNA为模板，以SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2所示的引物进行PCR扩增；若发生特异性扩增，则表明待测样品中包含水牛成分。

在一个优选例中，以SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2所示的引物以及SEQ ID NO：3所示的Taqman探针进行实时荧光PCR检测。

在另一优选例中，所述的待测样品是食品或饲料。

在另一优选例中，所述方法的检测灵敏度为10^-3ng/μL DNA。

在本发明的另一方面，提供一种引物，所述引物是引物对，其序列如SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2所示。

在本发明的另一方面，提供一种Taqman探针，其特征在于，所述的探针序列如SEQ ID NO：3所示。

在本发明的另一方面，提供所述的引物和/或所述的Taqman探针的用途，用于从待测样品中鉴定水牛成分。

在本发明的另一方面，提供一种鉴定水牛成分的试剂盒，其中包括所述的引物和/或所述的Taqman探针。

在一个优选例中，所述试剂盒中还包括：含有水牛成分的检测标准品。

在另一优选例中，所述试剂盒中还包括选自以下的试剂：DNA提取试剂，Taq酶，PCR缓冲液，DNA聚合酶，和/或说明鉴定水牛成分的方法的使用说明书。

本发明的其它方面由于本文的公开内容，对本领域的技术人员而言是显而易见的。

附图说明

图1、水牛成分的物种特异性实时荧光PCR检测图。扩增曲线从左到右分别是：摩拉水牛、尼里-拉菲水牛、摩拉水牛与广西水牛一代杂交水牛、摩拉水牛与广西水牛低代杂交水牛、摩拉水牛与广西水牛高代杂交水牛的牛奶样品的DNA。

图2、水牛DNA配比的实时荧光PCR检测灵敏度图。扩增曲线从左到右分别是：10ng/μL、1ng/μL、0.1ng/μL、0.01ng/μL、0.001ng/μL水牛牛奶样品的DNA。

图3、水牛奶重量比的实时荧光PCR检测灵敏度图。扩增曲线从左到右分别是(W/W)：10％水牛奶；1％水牛奶；0.1％水牛奶；0.01％水牛奶提取的DNA。

具体实施方式

本发明人经过广泛而深入的研究和试验，首次揭示一种可特异性鉴定水牛成分的引物，所述引物针对含有水牛成分的DNA可发生特异性扩增(获得阳性结果)，而对没有水牛成分的DNA不发生特异性扩增(获得阴性结果)。为了简化PCR扩增方法，本发明人还设计了配合所述引物的、用于进行实时荧光PCR的Taqman探针。采用所述的引物配合Taqman探针，可良好地应用于鉴定水牛成分，并且具有良好的再现性、灵敏度。