[发明专利]一种人血清淀粉样蛋白A1及其制备方法和应用

说明书

技术领域

本发明属于生物工程技术领域，具体涉及一种人血清淀粉样蛋白A1及其制备方法和应用。

背景技术

血清淀粉样蛋白A(Serum Amyloid A，SAA)是机体受到感染和损伤时分泌的一种主要的急性期蛋白。SAA是一个多态性蛋白的总称，由相关但各具独立基因的蛋白(SAA1-SAA4)组成。其中，人血清淀粉样蛋白A1(SAA1)由104个氨基酸组成，主要由肝细胞合成，人SAA2与人SAA1有7个氨基酸的差别，它们均为急性期蛋白，在炎症反应中作用相近。人SAA3是一个假基因，人SAA4在急性期反应中变化不大，在机体中持续少量产生。

研究表明，SAA1在急性和慢性炎症患者血清内含量均有变化，因此是一个反映感染性和非感染性炎症疾病的重要生物检测指标。SAA1不仅是慢性阻塞性肺病急性加重期的生物标志物，也是急性心梗患者在接受急诊冠状动脉介入手术后发生心脏破裂的预期因子，这为早期发现心脏破裂患者提供了重要参考指标。其他大量研究也表明，在胰腺炎、肝炎、冠心病、糖尿病、慢性肾脏疾病、类风湿性关节炎及肥胖病例中，SAA1升高与疾病活动和病程发展有非常密切的关系。目前临床研究还认为，所有急性期反应蛋白中，SAA1对急性炎症反应最敏感，升值幅度最大。同时研究还表明SAA1与甲胎蛋白等肿瘤相关蛋白相似，其在血清中的浓度与癌症发生呈正相关。因此，在临床上对SAA1在病人血清中含量的检测具有辅助诊断价值。

同时，SAA1不仅是一种简单的炎症标志物，还积极介入疾病的相关过程。在急性感染或者炎症发生时，血清内SAA1的水平可提升1000倍。高水平的SAA1将导致淀粉样病变，而且低密度脂蛋白LDL与SAA1的结合物(LDL-SAA)可提高心血管疾病的风险；同时，SAA1还具有促炎反应的特性，促进多种细胞因子的分泌，如IL-1β，IL-6，基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases，MMPs)，CCL20等，这些细胞因子都参与炎症导致的疾病的发病过程，如，风湿性关节炎，肌肉萎缩，痛风，动脉粥样硬化等。由于SAA1与多种疾病的发生相关，针对SAA1的治疗方法已越来越受到重视。

目前，已知SAA1与四种受体结合，Toll样受体(Toll-like receptors，TLR)包括TLR2和TLR4，CD36(B类清道夫受体，a class B scavenger receptor)，及其G蛋白偶联受体甲酰肽受体2/脂氧素A4受体(formyl peptide receptor 2/lipoxin A4 receptor，FPR2/LXA4R)。SAA1与不同的受体结合所发挥的生物学活性不一样，例如，SAA1与甲酰肽受体2结合可诱导滑液超常增生及其内皮细胞的增殖，从而导致类风湿性关节炎的发生；SAA1与CD36结合可促进胆固醇的代谢；SAA1与TLR2结合可产生炎症诱发因子，导致动脉粥样硬化等疾病；SAA1与TLR4结合可诱导NO的产生。

由此可见，SAA1在机体中发挥多种生物学活性。目前，SAA1均采用大肠杆菌表达获得，结合了革兰氏阴性菌细胞壁上的脂多糖即LPS，由于SAA1与脂多糖及其脂类有极强的结合作用，一旦结合就难于分离，难以获得不含脂多糖的SAA1。

此外，本领域还需要开发能够抑制天然SAA活性的物质，用于治疗SAA过高所造成的炎症及其疾病。

发明内容

本发明的目的在于，提供一种新型的hSAA1的制备方法，获得的hSAA1不受脂多糖干扰，并对其生物学功能进行研究。

本发明的第一方面，提供一种重组人血清淀粉样蛋白A1，所述重组人血清淀粉样蛋白A1为以酵母为宿主所表达的重组人血清淀粉样蛋白A1。

在另一优选例中，所述重组人血清淀粉样蛋白A1具有以下一个或多个特征：

(a)分子量为12～14KD的单体；

(b)抑制天然人血清淀粉样蛋白A的活性；

(c)具有抑制炎性细胞因子表达的能力。

在另一优选例中，所述炎性细胞因子包括IL-6、IL-1β、TNF-α、IL-12、MMP9。

本发明的第二方面，提供一种人血清淀粉样蛋白A1的多聚体，所述多聚体为第一方面所述的重组人血清淀粉样蛋白A1的多聚体。

在另一优选例中，所述多聚体具有以下一个或多个特征：

(a)所述多聚体是二聚体，三聚体、四聚体或其组合；

(b)抑制天然人血清淀粉样蛋白A的活性；

(c)具有抑制炎性细胞因子表达的能力。