[发明专利]一种高特异性聋病易感基因检测试剂盒及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种同时检测12个聋病易感基因荧光检测试剂盒，属于生物检测技术领域。

背景技术

世界范围内对听力语言残疾者进行的致病因素研究表明，约60-80％患者的病因与遗传因素有关，其中发达国家的临床研究数据表明，遗传性耳聋在耳聋患者中约占80％。因此近十几年来，遗传性耳聋的发病机制及其分子流行病学的研究成为了聋病研究最重要的内容之一。随着人类基因组计划完成，聋病基因的定位和克隆取得了巨大的进步，聋病的分子遗传学研究和分子流行病学的数据使研究者们逐步认识到聋病易感基因突变在维护听力健康和发现听力异常中的重要性。

在目前已经定位和克隆的耳聋相关基因中，GJB2、GJB3是最常见的易感基因，在先天性重度耳聋患者中约占30-50％。目前，在该基因已经发现了100多种突变类型，然而，不同种族GJB2基因常见的突变形式不同。在中国常见的突变形式为235delC，其在所有致病性突变中约占74.14％，约22.2％的中国耳聋患者与该突变有关。另外GJB2 299_300delAT、GJB2176_191del16的突变等位基因频率约为3％和1％。耳聋基因GJB3中的538C＞T突变位点被认为与高频听力下降有关。

药物的耳毒性是导致语前听力损失的一个重要因素，部分与线粒体12S rRNA基因1555A＞G突变有关，该突变可以增加耳蜗对氨基糖甙类药物的敏感性。在美国，耳毒性药物相关的听力损失患者中，10％的具有12S rRNA基因1555A＞G突变，美国语前听力损失患者中，1555A＞G突变患者的发病率约为1/20000-1/40000。在西班牙，12S rRNA基因1555A＞G突变与15-20％的家族性非综合征型听力损失有关，许多年老的家族成员即使没有使用氨基糖甙类药物也可发生因此突变导致的听力下降。而在中国，药物性耳聋的发病率超出了原有的想象，在一系列的文章报道中，发现在门诊发现的耳聋患者中，约5％的患者是由于12S rRNA基因1555A＞G突变导致的，而在聋哑学校这样一个特殊群体，则高达12％的患者是由于12SrRNA基因1555A＞G突变接触氨基糖甙类药物而致聋。同时在中国群体中还发现了12S rRNA基因1494C＞T突变与药物性耳聋的关系，目前至少已经发现了三个大的家系是由于1494C＞T突变导致的。1555A＞G突变和1494C＞T突变者在出生时往往听力正常，很难通过听力筛查而被提前发现和预测，却存在因耳毒性药物的使用而发生听力损失的隐患。

SLC26A4基因与弧立的大前庭水管综合征及Pendred综合征(前庭水管扩大或伴内耳畸形、神经性聋和甲状腺肿)的关系密切，临床上表现为先天性或后天性耳聋，耳聋发生或加重与外伤、感冒有关。通过颞骨CT扫描可以得出结论，但目前由于设备和专业人员的限制，中国大部分地区的医院不能进行高分辨率的颞骨CT扫描，导致许多地区无法诊断大前庭水管综合征。通过对SLC26A4基因的检测，则可以在全国范围内实现对80％以上大前庭水管综合征的准确诊断，并先于CT检查发现和确诊大前庭水管综合征，这一方法可以避免放射线检查的辐射问题，更易为患者家属接受，并且由于基因诊断操作能够批量进行，可以在大标本范围内进行筛查。在95例单一患者前庭水管扩大家系的患者中，97.9％(93/95)的具有该基因的突变，研究中共发现38种突变类型，包括E37X、P76L、T94I、P112S、349delC、387delC、G197R、G204V、D271G、916_917insG、G316X、N392S、Q421P、K440X、Q446X、Q514X、I529S、S532R、N558I、D573Y、1746delG、V659L、R685I、K77I、M147V、IVS7-2A＞G、A387V、N392Y、1181_1183delTCT、R409H、T410M、S448X、S448L、IVS14+1G＞A、IVS14-1G＞C、IVS15+5G＞A、L676Q、H723R。其中，大量研究数据表明，IVS7-2A＞G、2168A＞G致H723R、1174A＞T致N392Y、1226G＞A致R409H、1975G＞C致V659L、2027T＞A致L676Q在中国前庭水管扩大患者SLC26A4基因突变中占有较高的比例。