[发明专利]筛查16SrXII组植原体的芯片及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及生物信息学及生物检疫鉴定技术领域，尤其涉及筛查16SrXII组植原体的芯片及其应用。

背景技术

16Sr XII组植原体主要包括澳大利亚植原体候选种、Bois Noir植原体、顽固植原体(stolbur)等多种植原体。葡萄金黄化病是欧洲最具经济影响的葡萄黄化病，在欧洲葡萄园导致巨大产量损失。由澳大利亚植原体候选种引起的葡萄黄化病(以下简称为AusGY)在澳大利亚新南威尔士和维多利亚温暖地区的葡萄园中频繁发生。此外，澳大利亚植原体候选种还可以引起多种经济作物的严重病害：侵染葡萄时，引起葡萄黄化病，其症状和危害与葡萄金黄化病相似；侵染草莓时，引起草莓致死性黄化病，可导致草莓苗死亡；侵染番木瓜时，引起番木瓜顶枯病，是毁灭性病害；侵染澳洲朱蕉时，引起澳洲朱蕉猝衰病；侵染新西兰亚麻时，引起新西兰亚麻黄叶病，是致死性病害。因此，经济影响十分重要。

有观点认为澳大利亚植原体候选种起源于新西兰并随后传播到澳大利亚。尽管许多方面尚不清楚，但在其它植物上已经掌握的证据表明，应将其列为检疫性病害。EPPO也已经将此病列入警戒名单。澳大利亚植原体候选种专性寄生在寄主植物的韧皮部组织的筛管细胞中和介体昆虫如Oliarus atkinsoni Myers体内。迄今无法在活体外人工培养。用DAPI或Hoechst 33258荧光染色法可以在荧光显微镜下从韧皮部组织中观察到植原体的特异荧光，只有在电子显微镜下才能看清其粒体形态。澳大利亚植原体候选种无细胞壁，形态多样，大小一般在80～1000nm。目前对AusGY的研究尚不够深入，对其发生规律和侵染循环尚不清楚。葡萄上的传播介体昆虫尚不明确。有研究报道说澳大利亚和新西兰野生的一种臭草属植物Coprosma robusta可能是澳大利亚植原体候选种的库源寄主。尽管在新西兰亚麻上已经明确叶蝉Oliarus atkinsoni是葡萄金黄化植原体的传播介体，但O.atkinsoni是单食性昆虫，肯定不是其它植物上的传播介体。由于澳大利亚植原体候选种的寄主范围广泛，因此，在不同植物上，其生活史会有所不同，侵染循环也复杂化。澳大利亚植原体候选种为种苗传，而且寄主范围广，易通过多种植物繁殖材料的进口贸易运输传入。

在新西兰很早就查明叶蝉Oliarus atkinsoni在新西兰亚麻上是该植原体的传播介体，但在葡萄等其它植物上的传播介体尚不清楚。不过有一点可以肯定：在不同的寄主上，澳大利亚植原体候选种存在不同的传播介体。O.atkinsoni主要危害新西兰亚麻，有可能随引种的新西兰亚麻传入。

目前，针对16SrXII组植原体的检测方法主要为①血清学检测方法，灵敏度不高，易产生假阳性；②基于核酸的分子生物学检测技术，主要包括PCR、实时荧光PCR等技术，灵敏度和特异性相对较高，但存在交叉污染，在通用性和标准化方面存在不足。

发明内容

本发明的一个目的是提供一种筛查16SrXII组植原体的探针。

本发明提供的筛查16SrXII组植原体的探针，由3条探针组成，所述3条探针的核苷酸序列依次分别为序列表中的序列1-序列3。

上述探针中，所述16SrXII组植原体为澳大利亚植原体候选种。

本发明的另一个目的是提供一种筛查16SrXII组植原体的基因芯片。

本发明提供的筛查16SrXII组植原体的基因芯片，为将上述的探针固定在片基表面得到的基因芯片。

在上述基因芯片中，所述片基为醛基化玻璃片基，在本发明的实施例中采用的是博奥生物有限公司晶微阵列基片，产品目录号：420022。

在上述基因芯片中，所述16SrXII组植原体为澳大利亚植原体候选种。

本发明的第三个目的是提供一种筛查16SrXII组植原体的试剂盒。

本发明提供的试剂盒，包括上述的基因芯片。

在上述试剂盒中，还包括如下引物组：

所述引物组由引物对A和引物对B组成；

所述引物对A由引物1和引物2组成；

所述引物对B由引物3和引物4组成；

所述引物1的核苷酸序列为序列表中的序列4；

所述引物2的核苷酸序列为序列表中的序列5；

所述引物3的核苷酸序列为序列表中的序列6；

所述引物4的核苷酸序列为序列表中的序列7；

上述试剂盒由上述的基因芯片和上述引物组组成。

上述试剂盒中，所述16SrXII组植原体为澳大利亚植原体候选种。