[发明专利]EPSP合酶基因水稻叶绿体表达载体及其应用

权利要求书

1.一种5-烯醇式丙酮莽草酸-3-磷酸合酶基因水稻叶绿体表达载体，其特征在于，包括：5-烯醇式丙酮莽草酸-3-磷酸合酶基因的表达盒，水稻叶绿体基因组的同源重组片段atpB以及rbcL；其中，5-烯醇式丙酮莽草酸-3-磷酸合酶基因的表达盒位于同源重组片段atpB和rbcL之间。

2.按照权利要求1所述的5-烯醇式丙酮莽草酸-3-磷酸合酶基因水稻叶绿体表达载体，其特征在于：所述的5-烯醇式丙酮莽草酸-3-磷酸合酶基因的表达盒由水稻叶绿体启动子、5-烯醇式丙酮莽草酸-3-磷酸合酶基因和终止子组成。

3.按照权利要求2所述的5-烯醇式丙酮莽草酸-3-磷酸合酶基因水稻叶绿体表达载体，其特征在于：所述的水稻叶绿体启动子包括prrn、atpA、atpB、psbA、psbD或rbcL；所述的终止子为rbcL终止子。

4.按照按照权利要求3所述的5-烯醇式丙酮莽草酸-3-磷酸合酶基因水稻叶绿体表达载体，其特征在于：所述的psbA启动子的核苷酸序列为SEQ ID No.1所示；所述rbcL终止子的核苷酸序列为SEQID NO:2 所示。

5.按照权利要求1所述的5-烯醇式丙酮莽草酸-3-磷酸合酶基因水稻叶绿体表达载体，其特征在于：所述的同源重组片段atpB的核苷酸序列为SEQ ID No.3所示；所述的同源重组片段rbcL的核苷酸序列为SEQ ID No.4所示。

6.按照权利要求1所述的5-烯醇式丙酮莽草酸-3-磷酸合酶基因水稻叶绿体表达载体，其特征在于：还含有显性选择标记基因的表达盒；所述的显性选择标记基因优选为细菌来源的抗菌素抗性基因；更优选为抗潮霉素基因，其核酸序列为SEQ ID NO.5。

7.含有权利要求1-6任何一项所述的5-烯醇式丙酮莽草酸-3-磷酸合酶基因水稻叶绿体表达载体的水稻愈伤组织、细胞或原生质体。

8.一种构建权利要求1-6任何一项所述5-烯醇式丙酮莽草酸-3-磷酸合酶基因水稻叶绿体表达载体的方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）、将5-烯醇式丙酮莽草酸-3-磷酸合酶基因可操作的与水稻叶绿体特异启动子和终止子相连接，使5-烯醇式丙酮莽草酸-3-磷酸合酶基因置于水稻叶绿体特异启动子和终止子的调控之下，得到5-烯醇式丙酮莽草酸-3-磷酸合酶基因的表达盒；

（2）、将水稻叶绿体基因组中的同源重组片段atpB以及rbcL分别可操作的连接在5-烯醇式丙酮莽草酸-3-磷酸合酶基因的表达盒的两侧。

9.权利要求1-6任何一项所述5-烯醇式丙酮莽草酸-3-磷酸合酶基因水稻叶绿体表达载体在提高水稻草甘膦抗性中的应用。

10.按照权利要求9所述的应用，其特征在于，包括：将所述的5-烯醇式丙酮莽草酸-3-磷酸合酶基因水稻叶绿体表达载体转化水稻愈伤组织、细胞或原生质体，筛选得到水稻抗性愈伤组织或细胞；(3)诱导水稻抗性愈伤组织或细胞分化，再生获得水稻抗草甘膦植株。