[发明专利]一种利用异核苷对siRNA序列进行化学修饰的方法、及其产品和应用

权利要求书

1.一种利用异核苷对siRNA序列进行化学修饰的方法，其特征在于在欲修饰的siRNA序列的正义链和/或反义链的一个或多个位点掺入化学式I或化学式II所示的异核苷化合物以代替天然核苷化合物在相应位置进行偶联，

其中，B为胸腺嘧啶基(T)、尿嘧啶基(U)、胞嘧啶基(C)、鸟嘌呤基(G)或腺嘌呤基(A)，相比于天然核苷化合物，碱基由糖环的1’-位移至糖环的2’-位，化学式I所示的异核苷为L-构型的异核苷，化学式II所示的异核苷为D-构型的异核苷。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于在进行siRNA修饰前，将化学式I和/或化学式II所示的异核苷化合物分别制备成化学式III和/或化学式IV所示的异核苷亚磷酰胺单体，

其中B为苯甲酰基保护的腺嘌呤碱基(A-Bz)、尿嘧啶碱基(U)、苯甲酰基或异丙酰基保护的鸟嘌呤基(G-Bz或G-iBu)、或苯甲酰基保护的胞嘧啶基(C-Bz)。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于使用固相合成，采用亚磷酰胺法，在DNA合成仪上，将一个或几个权利要求2所述的异核苷亚磷酰胺单体代替天然核苷亚磷酰胺单体在相应位置进行偶联以掺入到所合成的序列中，每偶联一个核苷为一个循环，每个循环包括四个反应：脱DMT、偶联、封闭、氧化。

4.根据权利要求3所述的合成方法，其特征在于合成DNA寡核苷酸链的条件是采用增加异核苷亚磷酰化单体的进样次数至3次；每次进样后的偶联时间为300秒/次；合成异核苷修饰的RNA寡核苷酸链的条件是每个循环进样后的偶联时间增加至900秒/次，偶联3次。

5.根据权利要求1-4任一项所述的方法合成的异核苷修饰的siRNA的序列。

6.根据权利要求5所述的siRNA的序列，其特征在于所述的序列为异核苷修饰的针对人MEK-1基因的siRNA序列。

7.根据权利要求6所述的siRNA的序列，其特征在于修饰前的siRNA序列为：

正义链：5’-GCAACUCAUGGUUCAUGCUdtdt-3’

反义链：3’-dtdtCGUUGAGUACCAAGUACGA-5’。

8.根据权利要求7所述的siRNA序列，其特征在于在siRNA序列的正义链的1位、8位、9位、11位或12位其中一位或者多位上掺入化学式I或化学式II所示的异核苷，代替天然核苷在相应位置进行偶联，优选的，在siRNA序列的正义链的8位上掺入化学式I或化学式II所示的异核苷，代替天然核苷在相应位置进行偶联，更优选的，在siRNA序列的正义链的8位上掺入化学式II所示的异核苷，代替天然核苷在相应位置进行偶联。

9.权利要求6-8任一项所述的siRNA序列在制备治疗人黑色素瘤药物中的应用。

10.权利要求6-8任一项所述的siRNA序列在制备抗病毒药物中的应用，所述病毒为依赖细胞RAF/MEK/ERK信号通路复制的病毒，优选的，所述病毒包括甲型流感病毒、单纯疱疹病毒II型(HSV-2)、Borna病病毒、痘病毒、人类免疫缺陷病毒1型、柯萨奇病毒、乙型肝炎病毒(HBV)、丙型肝炎病毒(HCV)和戊型肝炎病毒(HEV)。