[发明专利]沙门氏菌鞭毛蛋白衍生物在制备防治炎症性肠病药物中的应用

说明书

技术领域

本发明属于医药领域中重组蛋白在药物研发中的新用途，特别是涉及一种沙门氏菌鞭毛蛋白衍生物(代号CZLC331)在研制用于防治炎症性肠病药物中的新用途。

背景技术

溃疡性结肠炎(Ulcerative Colitis，UC)又称特发性溃疡性结肠炎或慢性非特异性溃疡性结肠炎，是一种以粘膜及粘膜下层浸润为主、特发于大肠的慢性非特异性炎症性肠病，主要临床症状表现为：腹痛、腹泻、粘液便和血便，并伴有多发性硬化症、视神经炎和骨质疏松等病症。由于该病具有治疗难度大、疗程长及易复发等特点，已被世界卫生组织确定为现代难治病。虽然现已有多种炎症性肠病治疗药物，如氨基水杨酸类药物、糖皮质激素类药物和免疫抑制剂等，但是它们却具有疗效差(尤其是中重度UC)、起效慢、疗程长、副作用大等缺点，因此，市场上迫切需要一种疗效显著、起效快、疗程短、安全性高、副作用小、用药方便的预防和治疗炎症性肠病(特别是慢性非特异性溃疡性结肠炎)的药物。

关于沙门氏菌鞭毛蛋白衍生物，已有研究表明，沙门氏菌鞭毛蛋白衍生物CBLB502(标准命名)对造血系统有保护作用，可延长高剂量放射损伤后小鼠的生存时间，并可提高低剂量照射小鼠的生存率(Lyudmila G.Burdelya，et al，.An Agonist ofToll-Like Receptor 5 Has Radioprotective Activity in Mouse and Primate Models.Science 2008；320(5873)：226-230)。深入研究发现沙门氏菌鞭毛蛋白及包含其N-和C-端保守结构域的衍生物均具有辐射防护作用，能够有效提高小鼠骨髓中造血干细胞数量有效地预防致死剂量照射引起的小鼠死亡，其机制为通过NF-κB信号通路发挥抗凋亡作用。提示该沙门氏菌鞭毛蛋白衍生物CBLB502可向抗辐射药物方向发展。目前并没有任何关于沙门氏菌鞭毛蛋白衍生物向抗辐射药物以外其它药用方向的研究报道。

发明内容

本发明的目的是提供一种沙门氏菌鞭毛蛋白衍生物CZLC331在防治炎症性肠病药物研发与制备中的用途。

本发明所述沙门氏菌鞭毛蛋白衍生物CZLC331对炎症性肠道疾病如溃疡性结肠炎和克罗恩病等具有良好的预防和治疗效果，因此，以该蛋白为活性成分，可以制备成预防和治疗炎症性肠病的药物。

本发明所述沙门氏菌鞭毛蛋白衍生物CZLC331是包括Tat蛋白转导肽、沙门氏菌鞭毛蛋白自N端第1-176位氨基酸残基和第402-505位氨基酸残基的融合蛋白；所述沙门氏菌鞭毛蛋白自N端第1-176位氨基酸残基和第402-505位氨基酸残基可通过柔性连接肽连接。

可采用常规原核表达方法制备沙门氏菌鞭毛蛋白衍生物CZLC331，纯度大于95％。

具体制备沙门氏菌鞭毛蛋白衍生物CZLC331的方法可包括以下步骤：

1)合成沙门氏菌鞭毛蛋白衍生物CZLC296编码基因，其核苷酸序列如序列表中序列1所示；所述沙门氏菌鞭毛蛋白衍生物CZLC296是通过柔性臂将沙门氏菌鞭毛蛋白自N端第1-176位氨基酸残基和自N端第402-505位氨基酸残基连接得到的；

2)将人工合成的沙门氏菌鞭毛蛋白衍生物CZLC296编码基因克隆到携带Tat转导肽编码序列的原核表达载体中，得到携带Tat蛋白转导肽编码序列和沙门氏菌鞭毛蛋白衍生物CZLC296编码基因的原核表达载体；所述N端连接有Tat蛋白转导肽的沙门氏菌鞭毛蛋白衍生物命名为CZLC331，编码该蛋白的基因的核苷酸序列如序列表中序列2所示；

3)将重组表达载体pET28b-Tat-CZLC331转化入宿主菌；

4)诱导表达含有携带Tat蛋白转导肽编码序列和沙门氏菌鞭毛蛋白衍生物CZLC296基因的原核表达载体的宿主菌；

5)分离及纯化表达的重组蛋白，得到沙门氏菌鞭毛蛋白衍生物CZLC331蛋白。

在上述沙门氏菌鞭毛蛋白衍生物CZLC331制备方法中，所述步骤2)中携带Tat转导肽编码序列的原核表达载体为任意一种可在大肠杆菌中表达的原核表达载体，如pET-22b系列、pET-28系列或pET-15系列等，优选为pET28b-Tat；以pET28b-Tat为出发载体构建的携带沙门氏菌鞭毛蛋白衍生物CZLC331编码基因的重组表达载体为pET28b-Tat-CZLC331。