[发明专利]沙门氏菌鞭毛蛋白衍生物在制备防治炎症性肠病药物中的应用

权利要求书

1.沙门氏菌鞭毛蛋白衍生物CZLC331蛋白在防治炎症性肠病药物研发中的应用。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述炎症性肠病包括溃疡性结肠炎和克罗恩病。

3.根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于：所述沙门氏菌鞭毛蛋白衍生物CZLC331是包括Tat蛋白转导肽、沙门氏菌鞭毛蛋白自N端第1-176位氨基酸残基和第402-505位氨基酸残基的融合蛋白；所述沙门氏菌鞭毛蛋白自N端第1-176位氨基酸残基和第402-505位氨基酸残基可通过柔性连接肽连接。

4.根据权利要求1至3任一所述的应用，其特征在于：所述沙门氏菌鞭毛蛋白衍生物CZLC331蛋白可采用常规的原核表达的方法制备得到，纯度大于95％。

5.根据权利要求1至4任一所述的应用，其特征在于：所述沙门氏菌鞭毛蛋白衍生物CZLC331蛋白按包括以下步骤的方法制备得到：

1)合成沙门氏菌鞭毛蛋白衍生物CZLC296编码基因，其核苷酸序列如序列表中序列1所示；所述沙门氏菌鞭毛蛋白衍生物CZLC296是通过柔性臂将沙门氏菌鞭毛蛋白自N端第1-176位氨基酸残基和自N端第402-505位氨基酸残基连接得到的；

2)将人工合成的沙门氏菌鞭毛蛋白衍生物CZLC296编码基因克隆到携带Tat转导肽编码序列的原核表达载体中，得到携带Tat蛋白转导肽编码序列和沙门氏菌鞭毛蛋白衍生物CZLC296编码基因的原核表达载体；所述N端连接有Tat蛋白转导肽的沙门氏菌鞭毛蛋白衍生物命名为CZLC331，编码该蛋白的基因的核苷酸序列如序列表中序列2所示；

3)将重组表达载体pET28b-Tat-CZLC331转化入宿主菌；

4)诱导表达含有携带Tat蛋白转导肽编码序列和沙门氏菌鞭毛蛋白衍生物CZLC296基因的原核表达载体的宿主菌；

5)分离及纯化表达的重组蛋白，得到沙门氏菌鞭毛蛋白衍生物CZLC331蛋白。

6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于：所述步骤2)中携带Tat转导肽编码序列的原核表达载体为任意一种可在大肠杆菌中表达的原核表达载体，如pET-22b系列、pET-28系列或pET-15系列，优选为pET28b-Tat；以pET28b-Tat为出发载体构建的携带沙门氏菌鞭毛蛋白衍生物CZLC331编码基因的重组表达载体为pET28b-Tat-CZLC331；所述步骤3)中的宿主菌为E.coli BL21(DE3)、E.coli ER2566(DE3)、E.coli BL21(DE3，plysS)、E.coli JM109、E.coli HB101或E.coli Top10等，优选为E.coli BL21(DE3)。

7.根据权利要求1-6任一项所述的应用，其特征在于：所述药物可以制成注射液、口服液、灌肠液、胶囊、肠溶片、粉剂或粒剂，优选为注射液、灌肠液或肠溶片。

8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于：所述胶囊、肠溶片、粉剂和粒剂等固态剂型的药物中活性成分沙门氏菌鞭毛蛋白衍生物CZLC331蛋白的质量百分含量为1-35％；所述注射液、口服液和灌肠液等液态剂型的药物中活性成分沙门氏菌鞭毛蛋白衍生物CZLC331蛋白的浓度可为2-64g/L；在所述药物中可以加入一种或多种药学上可接受的辅料，包括药学领域常规的吸收促进剂、表面活性剂、润滑剂、稳定剂、稀释剂、粘合剂、湿润剂、崩解剂、稀释剂、吸附载体、赋形剂，必要时还可加入色素、甜味剂及香味剂。

9.根据权利要求7所述的应用，其特征在于：所述药物为蛋白注射液，由重量体积比为5％(5g/100mL)的CZLC331蛋白、0.85％(0.85g/100mL)的氯化钠和注射用水组成。

10.根据权利要求7或8所述的应用，其特征在于：所述药物为肠溶片，由CZLC331蛋白100重量份，乳糖60重量份，微晶纤维素20重量份、羧甲基淀粉钠20重量份、聚维酮K₃₀ 10重量份混合制粒，再将干颗粒按重量份2500∶50的比例加入滑石粉混合均匀压片，再在压片表边喷雾涂覆肠溶薄膜衣层制成。