[发明专利]一种制备带有突出末端的双链DNA分子的方法

权利要求书

1.一种制备带有突出末端的双链DNA分子的方法，包括下列步骤：

1)根据模板以及对应目标DNA分子的序列，分别设计带有标记的正向引物、不带标记的正向引物、带有标记的反向引物及不带标记的反向引物；

2)将带有标记的引物与不带标记的引物交叉配对，分别PCR扩增模板获得两组扩增产物；

3)将步骤2获得的两组扩增产物混合，变性后退火；

4)纯化分离出退火产物中不带标记的分子，该不带标记的分子即为带有突出末端的目标DNA分子。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤1)中，引物的设计原则是：由不带标记的正向引物和带标记的反向引物扩增所得到的DNA的正义链与目标DNA分子中的正义链一致；由带标记的正向引物和不带标记的反向引物扩增所得到的DNA的反义链与目标DNA分子中的反义链一致；由不带标记的正向引物和带标记的反向引物扩增所得到的DNA的正义链与由带标记的正向引物和不带标记的反向引物扩增所得到的DNA的反义链所组成的DNA分子为目标DNA分子。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述目标DNA分子是指带有突出末端的双链DNA分子，该DNA分子的一端或者两端，其中的一条链有比其互补链多余的碱基，多余碱基的数量为一个或多个。

4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述标记是指，可以通过共价键连接到DNA分子上，而不影响DNA本身特性和功能的一类具有特定结构和功能的分子或基团。

5.如权利要求4所述的方法，其特征在于，所述标记选自生物素、双生物素、地高辛、Nitrondole和Cholesteryl。

6.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤3中两组扩增产物等摩尔比例混合。

7.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤4采用能与所述标记结合的树脂或介质去除退火产物中带标记的分子来分离出目标DNA分子。

8.如权利要求7所述的方法，其特征在于，所述能与所述标记结合的树脂或介质为结合有亲和素、链霉亲和素、抗生物素抗体、抗地高辛抗体、抗Nitrondole抗体或抗Cholesteryl抗体的树脂或介质。

9.如权利要求7所述的方法，其特征在于，步骤4还结合其他常用的DNA纯化方法进一步纯化以去除杂质。