[发明专利]果胶磺化的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种果胶磺化的方法，属于高分子领域。该类磺化果胶多糖有显著的抗凝血活性。作为药物开发、保健品研发等都有较好的前景。

背景技术

磺化多糖是多糖分子中某些羟基被硫酸酯基取代而形成的一类带有负电荷的生物大分子，广泛存在于自然界的各种生物体中，具有广泛的生物活性。随着研究的深入，人们发现多数硫酸多糖具有显著的抗凝血、抗肿瘤和抗病毒等活性(Smorenburg等人，2001；Mao，W.等人，2009；Huashi，C.，1988)。目前，国内外对酸性多糖的研究主要集中在海洋领域，如海带岩藻聚糖硫酸酯，海参中的酸性粘多糖，绿藻酸性多糖等；以及动物体内的肝素，硫酸软骨素等，但是对陆生植物中酸性多糖的结构和活性研究尚未引起重视。而果胶多糖是一类以重复的聚半乳糖醛酸为主链的酸性多糖，其结构与海洋药物藻酸双酯钠(PSS)(Smorenburg等人，2001)的主要差别为其糖环羟基上未被硫酸基取代，而目前国内外有关其磺化化修饰方法及酯化后产物仍少有报道，而开展这方面的工作对进一步提高果胶产品的保健和医疗价值具有重要的意义。

磺化多糖同时是肝素替代药物重要来源。肝素用于预防和治疗血栓性疾病已有数十年的历史，但由于较大的出血副作用而限制了其临床应用。而且近年来发生的肝素污染事件也迫使人们寻找新的肝素类候选药物。当前研究者更有兴趣从非哺乳动物来源制备治疗性药物，以减少病原体污染的危险性，而天然酸性多糖是肝素类候选药物的重要来源。

管华诗等对海藻中的褐藻酸钠分子的羟基及羧基上分别引入硫酸酯基及丙二醇酯基所形成的藻酸双酯钠(Propylene Glycol Alginate Sulphate Sodium，PSS)，进一步研究表明其磺化衍生物具有良好的抗凝血、降血脂和抗血栓活性。同样类似的，甘糖酯(Propylene glycol mannuronate sulfate，PGMS)是聚甘露糖醛酸磺化的衍生物，已作为防治心脑血管疾病的新药在临床上使用多年。赵峡等发现褐藻中另一种多糖聚古罗糖醛酸经硫酸化后在抗凝血和尿路结石症的预防和治疗方面显示出了良好的应用前景。陈士国等的研究则发现，岩藻糖基化的美国肉参硫酸软骨素在抗凝、抑制血栓生成方面活性甚至由于肝素，且其出血副作用低于肝素。赵雪等对海带中的硫酸化岩藻多糖和及其低分子量产物的研究也表明不同分子量海带硫酸岩藻多糖均具有抗凝活性，且分子量越大，硫酸根含量越高，抗凝效果越好。而同样作为酸性多糖的果胶与这些果糖相比，具有复杂的毛发支链区，只是支链未发生磺化。

国内外对多糖的磺化方法主要包括氯磺酸-吡啶法，浓硫酸法，三氧化硫吡啶法等。

现国内外对果胶的磺化方面的研究还没成熟，资料也相对较少。相比于传统抗凝血药物，磺化果胶在抗肿瘤，免疫调节活性，凝血性方面表现不仅更为优越，并且可以减少传统抗凝血剂的一系列如出血、过敏反应、血小板减少、潜在的人畜疾病传播等等副作用。果胶磺化多糖有着很大的开发潜力。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种果胶磺化的方法，该方法是以果胶多糖为原料，制备出相应的磺化果胶多糖；该方法具有操作较为简单、磺化效果较好等特点。

为了解决上述技术问题，本发明提供一种果胶磺化的方法，由果胶(果胶多糖)或者三乙胺果胶盐在二甲亚砜的环境下，由三氧化硫-吡啶复合物磺化，制得磺化果胶多糖。

作为本发明的果胶磺化的方法的改进，采用三氧化硫吡啶复合物-DMSO体系，包括以下步骤：

1)、制备磺化试剂：按照2～5g三氧化硫-吡啶复合物/10ml的二甲亚砜的用量比，将三氧化硫-吡啶复合物溶解于二甲亚砜中，得磺化试剂；

2)、称取果胶放入二甲亚砜中搅拌溶胀，得果胶悬浮液；所述果胶与二甲亚砜的料液比为：10～40mg果胶/1ml二甲亚砜；

3)、在60～100℃的水浴条件下，按照步骤1)中的三氧化硫-吡啶复合物与步骤2)中的果胶为10∶0.9～1.1的质量比，将磺化试剂加入果胶悬浮液中，反应1～3h；

4)、将步骤3)所得的反应产物滴加(缓慢)于冰水中，所得的溶液置于透析袋中于蒸馏水中透析20～30小时；

5)、将步骤4)所得的截留产物冷冻干燥，得磺化果胶多糖。

作为本发明的果胶磺化的方法的进一步改进：

步骤2)的搅拌时间为0.5～24h；

步骤4)为：将步骤3)所得的反应产物冷却至室温后滴加于5～10体积倍的冰水中；所述透析袋的截留分子量为7000Da。