[发明专利]一种邻苯二甲酸二正辛酯快速检测用胶体金试纸及其制备方法

说明书

技术领域

本发明一种邻苯二甲酸二正辛酯快速检测用胶体金试纸，同时还涉及一种该邻苯二甲酸二正辛酯快速检测用胶体金试纸的制备方法，属于残留的免疫化学速测技术领域。

背景技术

邻苯二甲酸酯类化合物(PAEs)又称酞酸酯，是一类环境雌激素，是常用增塑剂之一。被普遍应用于玩具、食品包装材料、医用血袋和胶管、乙烯地板和壁纸、清洁剂、润滑油、个人护理用品(如指甲油、头发喷雾剂、香皂和洗发液)等数百种产品中。邻苯二甲酸酯可干扰内分泌，使男性精子数量减少、运动能力低下、形态异常，严重的还会导致死精症和睾丸癌，是造成男性生殖问题的“罪魁祸首”，甚至影响胚胎发育，表现出殖发育毒性。

由于塑化剂对环境及人类健康的危害，WHO 1995年公布，邻苯二甲酸酯类化合物是必须控制一类扰乱内分泌的化学物质。基于PAEs在环境中的富集作用对人类健康造成的严重危害，EPA(美国国家环保局)将6种PAEs列为优先控制污染物：即邻苯二甲酸二甲酯(DMP)、邻苯二甲酸二乙酯(DEP)、邻苯二甲酸二丁酯(DBP)、邻苯二甲酸二异辛酯(DEHP)、邻苯二甲酸二正辛酯(DOP)和邻苯二甲酸丁基苄基酯(BBP)；8种PAEs被列入WWF(世界野生动物保护基金会)的环境激素名单中。在我国，DMP、DBP和DOP被列入“中国环境优先污染物黑名单”。

目前，邻苯二甲酸酯类化合物的检测方法有分光光度法、薄层色谱法、气相色谱法(GC)、气相色谱/质谱法(GC-MS)、高效液相色谱法(HPLC)。EPA的标准方法是GC-ECD-MS法，我国拟发布的标准方法是正相高效液相色谱法(NP-HPLC)。采用分光光度法分析PAEs时，只适用于PAEs总量的测定，在特定组分的检测上具有一定的局限性，并且检测限较高，难以适应微量检测的需要。色谱法是国内外比较常用的方法。在用GC-MS、HPLC方法检测PAEs时，具有更好的灵敏度和选择性。但这些方法大都需要复杂的前处理，昂贵的仪器设备，检测费时费力且成本高，与其它检测系统相比，一次检测样品量少，检测时间长，不适合现场快速检测，仅作为少数实验室的确证方法，满足不了环境和农产品检测快速简便的需要。目前还没有检测邻苯二甲酸酯的商品化的试剂盒和试纸条。因此，研究和建立具有我国自主知识产权的邻苯二甲酸酯免疫学检测方法，对提我国高环境和农产品邻苯二甲酸酯控制和监测水平，保障农产品质量安全和消费者的健康具有重要意义。

发明内容

本发明的目的在于提供一种敏感度高、成本低、检测时间短的邻苯二甲酸二正辛酯快速检测用胶体金试纸。

同时，本发明的目的还在于提供一种邻苯二甲酸二正辛酯快速检测用胶体金试纸的制备方法。

为了实现上述目的，本发明的技术方案采用了一种邻苯二甲酸二正辛酯快速检测用胶体金试纸，包括反应膜，结合物释放垫，在反应膜上包被有邻苯二甲酸二正辛酯-载体蛋白偶联物的测试区和羊抗鼠IgG的质控区，在结合物释放垫上包被有邻苯二甲酸二正辛酯单克隆抗体-胶体金标记物。

还包括样本垫，吸水垫和衬板，所述样本垫，结合物释放垫、反应膜及吸水垫依次设置在衬板上。

所述的邻苯二甲酸二正辛酯-载体蛋白偶联物由邻苯二甲酸二正辛酯经过硝化与还原反应后形成4-氨基邻苯二甲酸二正辛酯半抗原，然后再与载体蛋白偶联得到。

所述的邻苯二甲酸二正辛酯单克隆抗体-胶体金标记物中的邻苯二甲酸二正辛酯单克隆抗体是以邻苯二甲酸二正辛酯-载体蛋白偶联物作为免疫抗原免疫试验动物后制备获得。

所述的载体蛋白为牛血清白蛋白、人血清白蛋白、钥孔血蓝蛋白、卵清蛋白、铁蛋白或多聚赖氨酸。

本发明的技术方案还采用了一种制备邻苯二甲酸二正辛酯快速检测用胶体金试纸的方法，包括以下步骤：

(1)制备包被邻苯二甲酸二正辛酯单克隆抗体-胶体金标记物的结合物释放垫；

(2)制备具有包被邻苯二甲酸二正辛酯-载体蛋白偶联物的测试区和包被羊抗鼠IgG的质控区的反应膜；

(3)将步骤(1)制备好的结合物释放垫和(2)制备好的反应膜分别与样本垫、吸水垫和背衬组装成试纸。

本发明的制备邻苯二甲酸二正辛酯快速检测用胶体金试纸的方法，具体包括以下步骤：

(1)半抗原制备：将邻苯二甲酸二正辛酯与经过硝化与还原反应后形成4-氨基邻苯二甲酸二正辛酯半抗原；

(2)将邻苯二甲酸二正辛酯与载体蛋白偶联，形成邻苯二甲酸二正辛酯-载体蛋白偶联物；