[发明专利]一种检测邻苯二甲酸二甲酯的胶体金试纸卡及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种检测塑化剂的器具，尤其涉及检测邻苯二甲酸二甲酯的胶体金试纸卡，同时还涉及一种该胶体金试纸卡的制备方法。

背景技术

邻苯二甲酸酯类化合物可干扰内分泌，使男性精子数量减少、运动能力低下、形态异常，严重的还会导致死精症和睾丸癌，是造成男性生殖问题的“罪魁祸首”，甚至影响胚胎发育，表现出殖发育毒性。

目前，环境中残留、积累的邻苯二甲酸酯可以说普遍存在，人体主要通过食品和空气两个途径吸收它。越来越多的权威科学家认定，过去几十年来男性精子数量和生育能力的下降与摄入越来越多的邻苯二甲酸酯有关。为了男性健康，专家们呼吁男性少用化妆品。一般人容易会在塑胶制品包装中接触到邻苯二甲酸酯类，在生活中有很多食物在加工、加热、包装、盛装的过程里可能会造成塑化剂的溶出且渗入食物中。例如：塑胶玩具、覆盖食物微波加热的保鲜膜、盛装食物的塑胶容器、室内装潢或家庭产品亦多数属于塑胶材质、吃手扒鸡的塑胶手套、医疗用的塑胶手套或输血袋等，都可见邻苯二甲酸酯类的踪影。专家发现，含有邻苯二甲酸酯的软塑料玩具及儿童用品有可能被小孩放进口中，如果放置的时间足够长，就会导致邻苯二甲酸酯的溶出量超过安全水平，会危害儿童的肝脏和肾脏，也可引起儿童性早熟。一项最新的研究表明，邻苯二甲酸酯可能与美国男性肥胖以及糖尿病有关。在1982年，美国国家毒理规划署的实验报告就已确证大小白鼠通过食物长期吸收邻苯二甲酸酯可引发肝癌。

目前，邻苯二甲酸酯类化合物的检测方法有分光光度法、薄层色谱法、气相色谱法(GC)、气相色谱/质谱法(GC-MS)、高效液相色谱法(HPLC)。EPA的标准方法是GC-ECD-MS法，我国拟发布的标准方法是正相高效液相色谱法(NP-HPLC)。采用分光光度法分析PAEs时，只适用于PAEs总量的测定，在特定组分的检测上具有一定的局限性，并且检测限较高，难以适应微量检测的需要。色谱法是国内外比较常用的方法。在用GC-MS、HPLC方法检测PAEs时，具有更好的灵敏度和选择性。但这些方法大都需要复杂的前处理，昂贵的仪器设备，检测费时费力且成本高，与其它检测系统相比，一次检测样品量少，检测时间长，不适合现场快速检测，仅作为少数实验室的确证方法，满足不了环境和农产品检测快速简便的需要。目前还没有检测邻苯二甲酸酯的商品化的试剂盒和试纸条。因此，研究和建立具有我国自主知识产权的邻苯二甲酸酯免疫学检测方法，对提我国高环境和农产品邻苯二甲酸酯控制和监测水平，保障农产品质量安全和消费者的健康具有重要意义。

发明内容

本发明的目的在于提供一种敏感度高，检测时间短的检测邻苯二甲酸二甲酯的胶体金试纸卡。

同时，本发明的目的还在于提供了一种该检测邻苯二甲酸二甲酯的胶体金试纸卡的制备方法。

为了实现上述目的，本发明的技术方案采用了一种检测邻苯二甲酸二甲酯的胶体金试纸卡，包括反应膜，样本垫，结合物释放垫，吸水垫和背衬，在反应膜上包被有邻苯二甲酸二甲酯-载体蛋白偶联物的测试区和羊抗鼠IgG的质控区，结合物释放垫包被邻苯二甲酸二甲酯单克隆抗体-胶体金标记物。

所述的样本垫，结合物释放垫、反应膜及吸水垫依次设置在背衬上。

所述的邻苯二甲酸二甲酯-载体蛋白偶联物由邻苯二甲酸二甲酯经过硝化与还原反应后形成4-氨基邻苯二甲酸二甲酯半抗原，然后再与载体蛋白偶联得到。

所述的邻苯二甲酸二甲酯单克隆抗体-胶体金标记物中的邻苯二甲酸二甲酯单克隆抗体是以邻苯二甲酸二甲酯-载体蛋白偶联物作为免疫抗原免疫试验动物后制备获得。

所述的邻苯二甲酸二甲酯-载体蛋白偶联物中的载体蛋白为牛血清白蛋白、人血清白蛋白、钥孔血蓝蛋白、卵清蛋白、铁蛋白或多聚赖氨酸。

同时，本发明的技术方案还采用了一种检测邻苯二甲酸二甲酯的胶体金试纸卡的制备方法，包括以下步骤：

(1)制备包被邻苯二甲酸二甲酯单克隆抗体-胶体金标记物的结合物释放垫；

(2)制备具有包被邻苯二甲酸二甲酯-载体蛋白偶联物的测试区和包被羊抗鼠IgG的质控区的反应膜；

(3)将步骤(1)和步骤(2)制备好的结合物释放垫和反应膜分别与样本垫、吸水垫和背衬组装成试纸卡。

本发明的制备方法具体包括以下步骤：

(1)半抗原制备：将邻苯二甲酸二甲酯与经过硝化与还原反应后形成4-氨基邻苯二甲酸二甲酯半抗原；

(2)将邻苯二甲酸二甲酯与载体蛋白偶联，形成邻苯二甲酸二甲酯-载体蛋白偶联物；