[发明专利]一种高浓度发酵制备生物絮凝剂的方法

权利要求书

1.一种高浓度发酵制备生物絮凝剂的方法，其特征是，包括以下步骤：

(1)生产菌种的扩大培养

①斜面培养基及斜面菌种培养

斜面培养基：牛肉膏3-6g/L，大豆蛋白胨8-12g/L，液糖7-12g/L，NaCl 3-6g/L，pH7.0-7.2；

将微球菌DS16接种于新鲜斜面，并于28-30℃下保温培养36h；

②摇瓶培养基及摇瓶菌种培养

摇瓶培养基：液糖8-12g/L，大豆蛋白胨6-12g/L，酵母提取物0.3-0.8g/L，K₂HPO₄3-8g/L，KH₂PO₄2-7g/L，MgSO₄·7H₂O 0.3-0.9g/L，pH7.2；

每300mL三角瓶装液体摇瓶培养基70mL，每瓶接种斜面菌种一接种环，180r/min，28-30℃保温培养8-12h；

③生产菌种培养基及生产菌种培养

生产菌种培养基同摇瓶培养基；按2-5％的体积比接入摇瓶菌种进行通气培养，无菌空气通风比1∶0.35-0.65(V/V)，搅拌转速为150-250r/min，27-30℃下培养9-15h，得生产菌种备用；

(2)发酵

①发酵培养基

基础发酵培养基：液糖18-28g/L，尿素0.4-0.9g/L，(NH₄)₂SO₄1-5g/L，大豆蛋白胨0.6-1.2g/L，K₂HPO₄3-8g/L，NaH₂PO₄2-7g/L，MgSO₄·7H₂O 0.1-0.5g/L，FeSO₄·7H₂O 0.028g/L，MnCl₂·H₂O 0.035g/L，pH7.2；

补料发酵培养基：液糖48-68g/L；尿素1.0-3.0g/L，pH7.2；

②接种及发酵

发酵罐A中装入基础发酵培养基，然后按体积比5-10％接入生产菌种进行搅拌通气培养8-12h后，将培养液平均分装到三台发酵罐B中；然后分别在三台发酵罐B中加入培养液体积2倍的补料发酵培养基，继续培养22-30h；所述发酵罐A的培养条件为：无菌空气通风比1∶0.35-0.75(V/V)，搅拌转速为120-180r/min，温度为22-32℃，罐压为0.01-0.03MPa；所述发酵罐B控制的培养条件为：无菌空气通风比1∶0.25-0.65(V/V)，搅拌转速为90-170r/min，温度为20-30℃，罐压为0.01-0.03MPa；

(3)发酵液预处理

将发酵液升温至65-80℃，维持10-20min，然后趁热以离心机离心，得预处理发酵液备用；

(4)产品提取与制成

以氢氧化钠溶液调节预处理发酵液pH为5.8-7.5，在50-90r/min充分搅拌下加入1.6-2.6倍预处理发酵液体积的乙醇，得沉淀；将沉淀用离心机离心，将所得固形物以乙醇充分洗涤；将含醇固形物用真空干燥器干燥至水分小于5％，用粉碎机粉碎。

2.如权利要求1所述的一种高浓度发酵制备生物絮凝剂的方法，其特征是，所述步骤(4)控制真空干燥器的真空度为-0.07Mpa，温度为35-45℃。

3.如权利要求1所述的一种高浓度发酵制备生物絮凝剂的方法，其特征是，所述步骤(4)氢氧化钠溶液的重量百分比为8-12％，所述乙醇浓度为90％-95％(V/V)。

4.如权利要求1-3中任意一项所述的一种高浓度发酵制备生物絮凝剂的方法，其特征是，所述步骤(3)离心机转速为6000-8000转/分。