[发明专利]丹参酮IIA用于制备治疗p53突变或缺失肿瘤药物的应用

说明书

技术领域

本发明涉及天然药物领域，具体涉及丹参酮IIA在制备治疗p53突变或缺失肿瘤药物中的应用。 

背景技术

P53是一种抑癌基因，它所编码的p53蛋白能够通过多种机制发挥抗肿瘤作用，当DNA遭受持续损伤时，它能够激活DNA修复功能相关蛋白，并将细胞周期阻滞在G1/S期，为DNA修复提供足够的时间。而当DNA损伤达到不可修复的程度时，p53蛋白则能启动凋亡程序，保证基因组的稳定性。p53蛋白介导的细胞凋亡是抗肿瘤药物发挥药效的重要机制。而研究表明超过50％的人体肿瘤存在P53基因突变或缺失，P53基因突变与缺失往往会导致肿瘤对化疗药物的敏感性降低。因此，寻找不依赖于p53蛋白的新型抗肿瘤药物成为提高抗肿瘤疗效的关键之一。 

丹参酮(tanshinone，Tan)，为丹参根部的乙醚或乙醇提取物，是丹参的主要脂溶性有效成分。丹参酮II A(TSA)是主要有效成分之一，其结构式为： 

分子式为C₁₉H₁₈O₃。对其药理作用的深入研究发现，丹参酮II A具有确凿的抗炎、抗氧化、抗肿瘤、抑菌、保肝及保护脑血管细胞等多方面药理活性(药学专论，2008，17(1)：1-2)。200710025654.X公开了丹参酮IIA磺酸钠作为血脑屏障保护剂在脑部疾病中的应用；200910145560.5公开了丹参酮IIA在制备治疗肥胖及胰岛素抵抗的药物中的应用；200810044624公开了丹参酮IIA乳液在治疗肝病中的应用；201010583566.3公开了丹参酮IIA磺酸钠在制备辐射防护药物中的新应用。 

发明内容

本发明的目的是提供丹参酮IIA的一种新的医药用途，即其可以用于制备治疗p53突变与缺失肿瘤的药物。MTT实验和TUNEL实验结果显示丹参酮IIA能够在p53突变的H596细胞株中产生明显的细胞毒和凋亡作用，同时用P53siRNA将p53野生型的A549细胞中p53基因沉默后，并不影响丹参酮IIA对A549细胞的细胞毒和凋亡作用。丹参酮IIA能够剂量依 赖性的降低A549细胞的线粒体膜电位，增加BAX/Bcl-xl蛋白的比例，导致线粒体细胞色素c释放入胞浆，继而激活caspase，诱导细胞凋亡，而P53基因沉默对丹参酮IIA在A549细胞上述线粒体凋亡通路激活过程均不产生影响。 

附图说明

图1：A，P53基因沉默的确证；B，丹参酮IIA对p53突变的H596-NQO1细胞株的细胞毒作用及P53siRNA预处理对丹参酮IIA在p53野生型的A549细胞中细胞毒的影响。 

图2：丹参酮IIA对p53突变的H596-NQO1细胞株的凋亡诱导作用及P53siRNA预处理对丹参酮IIA在p53野生型的A549细胞中细胞凋亡的影响。 

图3：P53基因沉默对丹参酮IIA诱导的A549细胞线粒体膜电位降低的影响。 

图4：P53基因沉默对丹参酮IIA诱导的A549细胞Bax/Bcl-xl比率增高，线粒体细胞色素C释放的影响。 

图5：P53基因沉默对丹参酮IIA诱导的A549细胞Caspase活化的影响。 

具体实施方式

实施例1.MTT实验 

实验材料： 

人非小细胞肺癌细胞A549细胞及H596细胞购自ATCC，于37℃，5％CO₂条件下常规培养，培养基为含10％小牛血清(PAA)的RPMI-1640(Gibco)。全基因合成NQO1基因，下游融合IRES2-EGFP，构建含有NQO1-IRES-EGFP片断的慢病毒表达载体。并利用293T细胞进行慢病毒的包装，将病毒原液浓缩，并测定病毒滴度。感染野生型H596细胞，构建NQO1稳定表达的H596细胞株(H596-NQO1)。RNAiMAX转染试剂及control siRNA，P53siRNA均购于Invitrogen.P53抗体购于Millipore。 

实验方法： 

1.P53基因沉默