[发明专利]电化学免疫传感器制备方法及其用于猪链球菌的检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种电化学免疫传感器，尤其涉及一种电化学免疫传感器的制备方法及其用于猪链球菌2型抗原的检测方法。

背景技术

猪链球菌(S. suis)是一种重要的人畜共患病原菌，表现为急性出血性败血症、心内膜炎、脑膜炎、关节炎、哺乳仔猪下痢和孕猪流产等。猪链球菌感染不仅可致猪败血症肺炎、脑膜炎、关节炎及心内膜炎，而且可感染特定人群发病，并致死亡，危害非常严重。猪链球菌病原体早已长期存在于猪群身上，因为外界环境发生的变化使得该病原体发生变异，从而突破种群障碍，通过伤口、消化道等途径传染给人。根据荚膜多糖(CPS)抗原成分不同，可以将猪链球菌分为35个血清型(1-34型和1/2型)。其中，猪链球菌2型(SS2)为最常见，也是毒力最强的血清型。猪链球菌是一种条件致病性病原菌，成年猪感染后一般不表现任何临床症状，但是，受到应激因素的刺激，往往会加剧发病率和死亡率。血清学调查或抗体水平监测有助于了解猪群中链球菌感染状况，为控制猪链球菌病提供科学的依据。

电化学免疫分析将分析化学与临床诊断相结合，利用抗原-抗体反应的特异性亲合作用建立了新型免疫分析技术，并广泛应用于临床各领域，是诊断疾病、疗效观察和医学科研的重要途径。然而，在临床检测中，通常对单个样品的检测成本较高，而批量的检测又会耽误病人的诊断时间，尤其对于心血管类急性疾病，快速准确的检测尤为重要。因此，基于对衡量标志物定量测定的要求，具有较高的灵敏度和短的响应时间的电流型免疫传感器逐渐成为人们关注的课题。

目前，用于猪链球菌2型检测的方法有ELISA、PCR、酶联免疫法、免疫色谱法及琼脂扩散试验等，但这些方法检测时间长，成本高，只适用于实验室诊断，不适合大量样品的检测。

发明内容

本发明的目的在于提供一种电化学免疫传感器的制备方法，该电化学免疫传感器能够快速检测猪链球菌2型抗原。

本发明的另一个目的在于提供上述电化学免疫传感器用于猪链球菌2型的检测方法。

本发明的目的是这样实现的，电化学免疫传感器的制备方法，其特征在于：用纳米金修饰玻碳电极，然后用缓冲溶液洗涤后晾干，将猪链球菌2型抗体1滴涂于所述玻碳电极表面，4 ℃过夜，再将所述玻碳电极在牛血清白蛋白（BSA）溶液中浸泡即得电化学免疫传感器。

上述玻碳电极用纳米金修饰前依次经1.0，0.3和0.05 μm 的Al₂O₃糊抛光后用蒸馏水冲洗干净，再分别在蒸馏水、丙酮、蒸馏水中超声洗涤、晾干。

上述猪链球菌2型抗体1的浓度为70 ug/mL，用量为10 uL。

上述牛血清白蛋白（BSA）溶液的浓度为0.25 wt.%。

上述修饰电极在牛血清白蛋白（BSA）溶液中浸泡时间为2 h。

本发明的另一个目的是这样实现的，上述电化学免疫传感器用于猪链球菌2型的检测方法，其特征在于，

1）合成羧基二茂铁纳米球（nFc）；

2）制备羧基二茂铁纳米球功能化石墨烯（nFc/Gr）；

3）制备生物耦合物；

4）将上述电化学免疫传感器浸泡在待测猪链球菌2型样品中孵育40 min，再将制备好的生物耦合物滴涂于其玻碳电极表面，1 h 后洗去未结合的生物耦合物，在pH= 6.5的磷酸盐缓冲液（PBS）中加入2 mm 抗坏血酸作为测试底液，用示差脉冲伏安法（DPV）进行检测，其峰电流的大小与浓度有关，从而可求得待测样品中的猪链球菌2型抗原的浓度。

上述合成羧基二茂铁纳米球（nFc）为取0.1 g 羧基二茂铁粉末溶于25 mL 无水乙醇中，再在超声条件下以 30 mL/min 速度加入125 mL 去离子水，然后在超声条件下放置25 min，最后用去离子水洗涤、干燥。