[发明专利]电化学免疫传感器制备方法及其用于猪链球菌的检测方法

权利要求书

1.电化学免疫传感器的制备方法，其特征在于：用纳米金修饰玻碳电极，然后用缓冲溶液洗涤后晾干，将猪链球菌2型抗体1滴涂于所述玻碳电极表面，4 ℃过夜，再将所述玻碳电极在牛血清白蛋白溶液中浸泡即得电化学免疫传感器。

2.如权利要求1所述的电化学免疫传感器的制备方法，其特征在于：所述玻碳电极用纳米金修饰之前依次经1.0μm、0.3μm和0.05 μm 的Al₂O₃糊抛光后用蒸馏水冲洗干净，再分别在蒸馏水、丙酮、蒸馏水中超声洗涤、晾干。

3.如权利要求1或2所述的电化学免疫传感器的制备方法，其特征在于：所述猪链球菌2型抗体1的浓度为70 ug/mL，用量为10 uL。

4.如权利要求3所述的电化学免疫传感器的制备方法，其特征在于：所述牛血清白蛋白溶液的浓度为0.25 wt.%。

5.如权利要求4所述的电化学免疫传感器的制备方法，其特征在于：所述修饰电极在牛血清白蛋白溶液中浸泡时间为2h。

6.如权利要求1-5任一项所述的电化学免疫传感器用于猪链球菌的检测方法，其特征在于：

1）合成羧基二茂铁纳米球；

2）制备羧基二茂铁纳米球功能化石墨烯；

3）制备生物耦合物；

4）将所述电化学免疫传感器浸泡在待测猪链球菌2型样品中孵育40 min，再将制备好的生物耦合物滴涂于其玻碳电极表面，1 h 后洗去未结合的生物耦合物，在pH= 6.5的磷酸盐缓冲液中加入2 mm 抗坏血酸作为测试底液，用示差脉冲伏安法进行检测。

7.如权利要求6所述的电化学免疫传感器用于猪链球菌的检测方法，其特征在于：所述合成羧基二茂铁纳米球为取0.1 g 羧基二茂铁粉末溶于25 mL 无水乙醇中，再在超声条件下以 30 mL/min 速度加入125 mL 去离子水，然后在超声条件下放置25 min，最后用去离子水洗涤、干燥。

8.如权利要求6或7所述的电化学免疫传感器用于猪链球菌的检测方法，其特征在于：所述制备羧基二茂铁纳米球功能化石墨烯为先将5 mg 石墨烯分散在5 mL聚醚酰亚胺溶液中，在135 ℃ 下回流3 h，用去离子水离心洗涤两次，然后将其分散在pH=7.4的磷酸盐缓冲液 中，再用摩尔比为4:1的1-（3-二甲氨基丙基）-3-乙基碳二亚胺/N-羟基琥珀酰亚胺活化羧基二茂铁纳米球表面的羧基，然后洗涤三次以分离多余的EDC/NHS，再将已活化的羧基二茂铁纳米球与聚醚酰亚胺功能化石墨烯溶液在室温下混合，搅拌4 h，经去离子水离心洗涤分离得羧基二茂铁纳米球功能化石墨烯的复合物,将其分散在pH=7.4的磷酸盐缓冲液中。

9.如权利要求6或7所述的电化学免疫传感器用于猪链球菌的检测方法，其特征在于： 所述制备生物耦合物为先将500 ng/mL 的猪链球菌2型抗体2用量为 500 μL加入所述羧基二茂铁纳米球功能化石墨烯的复合物中，冰浴搅拌12 h，离心分离，再加入过量的牛血清白蛋白溶液，冰浴搅拌5 h，离心分离制得生物耦合物。

10.如权利要求8所述的电化学免疫传感器用于猪链球菌的检测方法，所述制备生物耦合物为先将500 ng/mL 的猪链球菌2型抗体2 用量为500 μL加入所述羧基二茂铁纳米球功能化石墨烯的复合物中，冰浴搅拌12 h，离心分离，再加入过量的牛血清白蛋白溶液，冰浴搅拌5 h，离心分离制得生物耦合物。