[发明专利]利用幼穗拯救获得转基因小麦的方法有效
申请号: | 201210006728.6 | 申请日: | 2012-01-11 |
公开(公告)号: | CN103205455A | 公开(公告)日: | 2013-07-17 |
发明(设计)人: | 李根英;夏先春;李玉莲;高洁;宋国琦;宋华东;何中虎;黄承彦;樊庆琦;隋新霞;楚秀生 | 申请(专利权)人: | 山东省农业科学院作物研究所;中国农业科学院作物科学研究所 |
主分类号: | C12N15/82 | 分类号: | C12N15/82;A01H4/00;A01H5/00 |
代理公司: | 北京纪凯知识产权代理有限公司 11245 | 代理人: | 关畅;任凤华 |
地址: | 250100 山东*** | 国省代码: | 山东;37 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 利用 拯救 获得 转基因 小麦 方法 | ||
1.培育转基因小麦的方法,包括通过农杆菌介导将目的DNA转入小麦细胞的步骤,其特征在于,所述方法包括如下步骤:
1)将含有目的DNA表达载体的重组农杆菌接种于胚芽鞘长为1.0mm-1.2mm的露白小麦种子的茎尖分生组织中,培养所述露白小麦种子获得处于雌雄蕊分化期的幼穗;
2)取步骤1)得到的处于雌雄蕊分化期的幼穗进行离体脱分化得到愈伤组织,保留含有所述目的DNA的愈伤组织,得到所述转基因小麦。
2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于:步骤1)中所述接种是在所述胚芽鞘长为1.0mm-1.2mm的露白小麦种子的茎尖分生组织中注入1μL所述含有目的DNA表达载体的重组农杆菌菌液。
3.根据权利要求2所述的方法,其特征在于:所述重组农杆菌菌液的OD600为0.6。
4.根据权利要求2或3所述的方法,其特征在于:所述重组农杆菌菌液中含有乙酰丁香酮0.4mmol/L。
5.根据权利要求1-4中任一所述的方法,其特征在于:所述农杆菌为根癌农杆菌。
6.根据权利要求1-5中任一所述的方法,其特征在于:步骤2)中所述离体脱分化按照包括如下步骤的方法进行:将所述处于雌雄蕊分化期的幼穗接种于脱分化培养基中培养,获得愈伤组织。
7.根据权利要求1-6中任一所述的方法,其特征在于:步骤2)中所述离体脱分化得到愈伤组织,保留含有所述目的DNA的愈伤组织后,还包括将所述含有所述目的DNA的愈伤组织接种于分化培养基中培养,获得具有根茎叶的小麦植株的步骤。
8.根据权利要求6或7所述的方法,其特征在于:所述脱分化培养基和所述分化培养基的基础培养基为MS培养基。
9.根据权利要求7或8所述的方法,其特征在于:所述分化培养基中培养的光照条件为:连续光照,所述连续光照的光照强度为1500LUX。
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