[发明专利]调控寡核苷酸功能性的方法

权利要求书

1.调节感兴趣的寡核苷酸的功能性的方法，所述方法包括：

(i)将所述感兴趣的寡核苷酸与针对所述感兴趣的寡核苷酸的反义寡核苷酸接触，并且使所述感兴趣的寡核苷酸或者所述反义寡核苷酸中的一种或两者的核苷酸序列发生变化，其中所述序列变化调节所述感兴趣的寡核苷酸的功能性；或者

(ii)使寡核苷酸复合物发生序列变化，所述复合物包含与反义寡核苷酸杂交的感兴趣的寡核苷酸并且其中所述序列变化是在形成所述复合物的一部分的寡核苷酸中发生的并且调节了所述感兴趣的寡核苷酸的功能性。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述反义寡核苷酸为DNA。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其中所述功能性为感兴趣的寡核苷酸沿靶核酸进行延伸的能力。

4.根据权利要求3所述的方法，其中所述反义寡核苷酸针对蛋白质或核酸分子之一。

5.根据权利要求4所述的方法，其中所述反义寡核苷酸针对DNA分子。

6.根据权利要求4所述的方法，其中所述感兴趣的寡核苷酸为引物、适体、脱氧核酶、核酶或核糖核酸酶。

7.根据权利要求4或5所述的方法，其中所述感兴趣的寡核苷酸为基因、基因片段、染色体基因易位断裂点或通过核酸扩增产生的DNA。

8.根据权利要求1-7中任一项所述的方法，其中所述反义寡核苷酸为引物。

9.根据权利要求1所述的方法，其中所述方法包括将所述寡核苷酸杂交至反义寡核苷酸的3’端并促使所述感兴趣的寡核苷酸沿所述反义寡核苷酸3’延伸，其中所述感兴趣的寡核苷酸沿其进行延伸的所述反义核苷酸序列产生了所述寡核苷酸的延伸，其为以下之一：

(i)与所述靶核酸的核苷酸序列互补，并借此使所述感兴趣的寡核苷酸具有功能性

(ii)相对于所述靶核酸的核苷酸序列错配，并借此使所述感兴趣的寡核苷酸无功能性；或者

(iii)与所述感兴趣的寡核苷酸的另一个区域的核苷酸序列互补，并且其中所述延伸杂交至所述感兴趣的寡核苷酸的所述区域，借此形成了茎环构型并使所述感兴趣的寡核苷酸无功能性。

10.根据权利要求1所述的方法，其中所述方法包括：

(i)将反义寡核苷酸杂交至所述感兴趣的寡核苷酸的3’端并促使沿所述感兴趣的寡核苷酸的所述反义寡核苷酸的3’延伸，借此使所述感兴趣的寡核苷酸无功能性；或者

(ii)将反义寡核苷酸的3’端杂交至所述感兴趣的寡核苷酸的3’端并促使沿所述感兴趣的寡核苷酸的所述反义寡核苷酸的3’延伸和沿所述反义寡核苷酸的所述感兴趣的寡核苷酸的3’延伸，借此使所述感兴趣的寡核苷酸无功能性；或者

(iii)将寡核苷酸复合物与引物接触并使所述引物发生3’延伸，所述寡核苷酸复合物包含杂交至反义寡核苷酸的感兴趣的寡核苷酸，所述引物在与所述感兴趣的寡核苷酸杂交的区域的3’的区域与所述反义寡核苷酸杂交，其中延伸所述引物置换了所述感兴趣的寡核苷酸并且使所述感兴趣的寡核苷酸具有功能性；或者

(iv)延伸环状反义寡核苷酸的线性3’链，所述3’线性链杂交至5’线性链但是所述5’线性链比3’线性链更长并且包含与所述感兴趣的寡核苷酸互补的单链区并且其杂交至所述感兴趣的寡核苷酸，其中沿所述单链区延伸所述3’线性链置换了所述感兴趣的寡核苷酸并且使所述感兴趣的寡核苷酸具有功能性；或者

(v)选择性降解茎环核酸分子或所述线性反义链和感兴趣的寡核苷酸之间双螺旋中的一种的线性反义链，所述降解使感兴趣的互补线性寡核苷酸链为单链并且借此使其具有功能性；或者

(vi)将具有低T_m的感兴趣的寡核苷酸杂交至反义寡核苷酸并使所述感兴趣的寡核苷酸发生延伸，其中所述延伸的感兴趣的寡核苷酸形成升高的T_m并借此具有功能性；或者

(vii)接触寡核苷酸复合物，所述寡核苷酸复合物包含杂交至反义寡核苷酸3’端的感兴趣的寡核苷酸和杂交至与所述感兴趣的寡核苷酸杂交的区域的3’的所述反义寡核苷酸的第二寡核苷酸，并使所述感兴趣的寡核苷酸和所述第二寡核苷酸之间发生连接，其中调节了所述感兴趣的寡核苷酸的功能性。

11.根据权利要求1-10中任一项所述的方法，其中在核酸扩增、单管嵌套扩增、PCR、等温扩增、单链DNA的产生期间使用了所述方法。