[发明专利]一种轮状病毒疫苗及其制备方法

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体来说，涉及一种人轮状病毒疫苗及其制备方法。

背景技术

轮状病毒是一种分节段的双链RNA病毒，外部呈球形，直径70nm，结构稳定，双层衣壳，耐热，耐酸碱。

轮状病毒是引起婴幼儿腹泻的主要病原体之一。它主要是感染小肠上皮细胞，从而引起细胞损伤，病发腹泻。轮状病毒在寒冷的季节季节性流行，感染途径是粪-口途径。临床表现为急性胃肠炎，渗透性腹泻病等。在症状发生前大约会有两天的潜伏期。症状通常是从呕吐开始，接着是四到八天的大量腹泻。严重腹泻可引起脱水酸中毒及电解质紊乱，促发营养不良，如不及时治疗，可发生低血容量性休克进而危及生命。全世界每年因为轮状病毒感染导致的婴幼儿死亡的数量大约为90万，其中大多数在发展中国家。在我国，0～2岁以内的婴幼儿人数约为4000万人(含新生儿)，每年大约有1000万婴幼儿患轮状病毒感染性胃肠炎，占婴幼儿人数的1/4，是引起婴幼儿严重腹泻的最主要病原。

接种轮状病毒疫苗可以降低感染率。近年，不少患儿选择接种轮状病毒的疫苗，不过轮状病毒有很多种类，目前的检验设备只能验出有该病毒，无法查出病毒属于哪一类型，因此打疫苗后仍有机会感染，不过接种后就算受到感染，也可有八成几率避免出现重症。

发明内容

本发明所要解决的技术问题在于，为了克服现有技术中的缺陷，提供一种能够在人体内产生更快、更高的免疫应答反应，且副反应少的的人用新型轮状病毒疫苗。

本发明公开了一种利用Vero细胞来工业化大规模生产人用轮状病毒灭活疫苗的方法。本发明方法中病毒繁殖的细胞基质为Vero细胞，是世界卫生组织(WHO)准予用于人用生物制品的细胞基质。与二倍体细胞相比，具有易培养，并可满足用发酵罐(微载体技术)大规模生产等明显优势，Vero细胞现在已经被国内外广泛用于生产人用精制狂犬疫苗，乙脑疫苗等升级换代产品。

本发明公开了一种利用Vero细胞制备人用轮状病毒灭活疫苗的方法，包括下列步骤：

1.在培养基中静止或立体吸附培养Vero细胞，获得Vero细胞浓度达到10⁵-10⁷/ml的细胞基质培养液；

2.轮状病毒G1，G2，G3和G4，分别以0.01-0.2的感染剂量(M.O.I.)，将病毒接种到步骤1的细胞基质培养液中，培养3天；

3.用胰酶-EDTA消化获得病毒-细胞培养悬液；3.用胰酶-EDTA消化获得病毒-细胞培养悬液。

4.纯化病毒制备疫苗。

本发明还公开了一种疫苗组合物，包括病毒蛋白含量100-200μg/剂的利用上述方法制备获得的人用轮状病毒疫苗，和0.75mg/剂的磷酸铝佐剂。

具体实施方式

为了使本发明的技术手段、创作特征、达成目的与功效易于明白了解，下面结合实施例对本发明作进一步阐述。这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件或按照制造厂商所建议的条件。除非另行定义，文中所使用的所有专业与科学用语与本领域熟练人员所熟悉的意义相同。此外，任何与记载内容相似或均等的方法及材料皆可应用于本发明方法中。文中所述的较佳实施方法与材料仅作示范之用。

实施例1

自液氮容器中，取出Vero细胞株(来源，中国药品生物制品检定所)，离心1000rpm，10分钟，弃去原保存液，加入含有10％新生牛血清，0.20％水解乳蛋白的MEM营养液(pH用7％NaHCO₃调至6.8)置37℃培养，待细胞长成单层，然后用PBS洗涤，胰酶-EDTA消化，加入上述营养液，以1∶2分种率，每5天传代1次，直至获得批量生产需用的足够细胞。