[发明专利]一种基于外源动物特征DNA地沟油快速检测的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种检测地沟油的方法，以样品油中不应存在的动物外源成分作为地沟油的鉴别依据，以动物外源成分的线粒体特征DNA为检测的具体靶标，构建地沟油快速、灵敏、特异的检测方法。 

背景技术

目前，食品安全已成为社会关注的热点话题。其中，地沟油冒充食用油重新回流餐桌是其中一个突出的问题。 

地沟油，也称潲水油、泔水油，是质量、卫生极差，过氧化值、酸值、水分、羰基价、丙二醛、AFB1等指标超标的非食用油。它一般分为3类：一是狭义的地沟油，即将下水道中的油腻漂浮物或者将宾馆、酒楼的剩饭、剩菜经过简单加工、提炼出的油；二是劣质猪肉、猪内脏、猪皮加工以及提炼后的油；三是用于油炸食品的油使用次数超过规定要求后，再被重复使用或往其中添加一些新油后重新使用的油。地沟油中重金属、毒素(如丙烯醛、黄曲霉毒素)、过氧化值等都严重超标，并含有洗涤剂等类化学杂质，对人体具有很大危害性，食用后会引起呕吐、头痛、腹泻等不良反应，长期摄入会使细胞功能衰竭，甚至可成为癌变诱因。因此，地沟油严禁在食品中使用。据估计，每年返回餐桌的地沟油约有200～300万吨之多，这对社会与食品安全都造成非常大的危害。 

国外发达国家如美国、日本和欧盟等国家严格控制地沟油来源，只有专门公司才能进行回收，或者采取政府补贴回收方式，高价回收地沟油，使之不能流入市场或餐桌。除了严格控制回收渠道之外，他们还有完善处罚条例。由于国外制订了一系列法规，使地沟油很难再进入食用油市场，因此对于食用油中掺地沟油的检测研究很少。 

目前国内对于地沟油的检测主要有以下方面：利用正常食用油与地沟油在理化分析指标上存在的差异，主要包括酸价、过氧化值、水分、碘值、皂化值等进行检测；利用地沟油在回收及加工过程中受到的重金属污染进行检测；利用地沟油中含有的动物油脂，通过检测胆固醇含量进行判定；利用电导率法进行鉴定，油脂属非导电物质，电导率极低，且钠盐难溶于油脂，在正常食用油中含量很少。地沟油中残渣微粒，含有一定量盐，还有酸败产生化合物也会使电导率提高；利用薄层色谱法对地沟油经高温加热或反复使用后产生的极性物质(如丙稀酰胺、多环芳烃、醛基等)进行检测，当油品有明显极性组分拖尾现象时，即可判别是否为劣质油；利用荧光法检测，考虑到地沟油外源性污染物质特性，针对餐具洗涤剂表面活性剂十二烷基苯磺酸钠混在地沟油里，而食用油不含这种人工合成化学物质，可利用十 二烷基苯磺酸钠在地沟油水相中特征荧光波峰为检测对象进行地沟油的检测。 

由于地沟油的主要成分与食用油相同，仍然是“甘油三酯”，可以和食用油以任意比例互溶，单凭人的感官，地沟油的色、香、味与普通食用油几乎没有分别。由于来源多样、成分复杂，且勾兑比例不同，摆在专家面前的是千变万化的非标准样品，已很难通过感官分析和一些理化指标进行区分。即便是能探明底细的仪器也常常出现误判。 

2011年，济南格林生物能源有限公司跨省生产销售地沟油案被公安部指挥破获后，2011年9月卫生部曾发布消息，全力组织科研攻关研究鉴别地沟油检验方法。卫生部征集到7家技术机构研制的5种地沟油检测方法，分别从多环芳烃、胆固醇、电导率和外源基因四大类核心指标对地沟油进行检测，经专家论证后，发现这些方法特异性都不强。 

朱旭平等通过对样品油所含的外源动物基因进行荧光定量PCR检测的方法对地沟油进行了检测。其原理为：地沟油主要是由各种潲水、用于油炸食品中的油、劣质动物肉、内脏、毛皮等加工及提炼后产出的油炼制而成，这些原料在煎炸烹饪和回收过程中往往会含有一些动物性原料，因此含有其相应的核酸成分，如猪、牛和鱼类等哺乳动物的特征基因残留。目前市面上的合格食用油多为植物油，不存在动物性基因成分。因此，通过判断样品油中是否含有动物性基因成分，就可以推断该样品油是否为地沟油，或者样品油中是否混有地沟油。该检测方法在部分样品的检测中取得较好的效果，但地沟油的来源多样、加工工艺不同，有的地沟油经过高温、粉碎、搅拌等生产处理，细胞核基因组往往被破坏，因此，该方法采用细胞核基因组基因作为检测的对象，检测的特异性不强，无法达到地沟油有效鉴定的预期目的。 

发明内容

本发明的目的是提供一种快速特异检测地沟油的方法。 

本发明所提供的方法，称为基于外源动物特征DNA地沟油快速检测的方法，包括以下内容： 

1)动物特征DNA序列的确定