[发明专利]携带牛病毒性腹泻病毒非结构蛋白NS3优势区的融合蛋白及其重组表达方法与应用

说明书

技术领域

本发明属于融合蛋白及其重组表达方法与应用，特别是涉及一种携带牛病毒性腹泻病毒(Bovine viral diarrhea virus，BVDV)非结构蛋白NS3优势区的融合蛋白及其重组表达方法与其在牛病毒性腹泻病毒的ELISA检测中的应用。 

背景技术

牛病毒性腹泻病毒(Bovine viral diarrhea virus，BVDV)属于黄病毒科(Flaviviridae)瘟病毒属(Pestivirus)，为单股正链RNA病毒，与羊边界病病毒(Border diseasevirus，BDV)以及猪瘟病毒(Classical swine fever virus，CSFV)在血清学上有交叉反应(殷震，刘景华.动物病毒学[M].第2版.科学出版社，1997.631-645)。BVDV感染往往是亚临床性的或导致轻微和非特异性临床症状。然而，经胎盘感染可产出免疫耐受的持续性感染牛犊，这些持续感染动物终生带毒，持续排毒，成为牛群中的重要传染源，加重牛群的感染(Weiland E.Ahl R.Stark et al.A second envelope lycoproteinmediate neutralization of a pestivirus hog cholera virus [J]Virol，1992，(66)：3677-3682)。 

BVDV的感染分布全球，虽然感染率不同，但感染往往在许多国家流行，持续性感染的牛(PI)最高可达到1-2％，抗体阳性的牛可达60-85％(Houe H.Epidemiological features and economical importance of bovine virus diarrhoea virus(BVDV)infections.Vet Microbiol，1999，64(2-3)：89-107)。长期以来，该病一直严重影响畜牧业的发展，同时BVDV还是牛源生物制品(血清、冻精、冷冻胚胎及疫苗等)的常在污染源，给畜牧业和相关商业领域造成了巨大的经济损失。 

BVDV检测的“金标准”为病毒中和试验(Edwards S.The diagnosis of bovine virus diarrhoea-mucosal disease in cattle.Rev Sci Tech，1990，9(1)：115-30)，此方法敏感且特异，但需要进行细胞培养且劳动量大。而ELISA方法检测BVDV操作简便，费用低，可用于大批量样本的检疫，非常适用于临床诊断和检疫。传统的ELISA试剂盒基于BVDV感染的细胞，但BVDV在组织中产生的蛋白量较低，很难获得充足数量的纯蛋白质用于BVDV的诊断(Justewicz DM，Magar R，Marsolais G，et al.Bovine viral diarrhea virus-infected MDBK monolayer as antigen in enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA)for the measurement of antibodies in bovine sera.Vet.Immunol.Immunopathol，1987，14(4)：377-384)。