[发明专利]一种具有肿瘤细胞杀伤作用的CIK细胞的制备方法

权利要求书

1.一种具有肿瘤细胞杀伤作用的CIK细胞的制备方法，其特征在于，利用密度为1.084的Ficoll单核细胞分离液于PBS系统中分离外周血或脐带血单个核细胞，并且通过17-20天的诱导培养获得CIK细胞。

2.根据权利要求1所述的具有肿瘤细胞杀伤作用的CIK细胞的制备方法，其特征在于，Ficoll、外周血或脐带血、PBS混合体积比为1∶1∶1。

3.根据权利要求1所述的CIK细胞的制备方法，其特征在于，单个核细胞分离离心参数为：离心力250g，离心时间40分钟。

4.根据权利要求1所述具有肿瘤细胞杀伤作用的CIK细胞的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)临床获取外周血或脐带血，利用密度为1.084的Ficoll淋巴细胞分离液分离单个核细胞；

(2)D0天利用初始诱导培养基培养；D1天加入抗CD3抗体，IL-2；以后每三天补加基础培养基、自体血清和IL-2；第19天获得足量CIK细胞；

(3)对获得CIK细胞进行表面标志物检测和杀伤活力检测。

5.根据权利要求4所述的具有肿瘤细胞杀伤作用的CIK细胞的制备方法，其特征在于，按体积比浓度计，所述初始诱导培养基为淋巴细胞基础培养基98％、自体血清浓度为1％、双抗1％、IFN-γ浓度为2000u/ml；CIK维持培养基为淋巴细胞基础培养基98％、自体血清浓度为1％、双抗1％、IL-2浓度为1000u/ml。

6.根据权利要求5所述的具有肿瘤细胞杀伤作用的CIK细胞的制备方法，其特征在于，所述双抗为青霉素和链霉素。