[发明专利]抗肿瘤小肽FpAT的聚乙二醇化衍生物

说明书

技术领域

本发明涉及小肽FpAT的聚乙二醇化衍生物，其制备方法，含有它们的药物组合物以及其在治疗或预防肿瘤的药物中的应用，括在治疗肝癌、肺癌、胃癌、结肠癌、骨髓瘤等肿瘤的药物中的应用。

背景技术

肿瘤是危害人类生命健康最严重的疾病之一，目前治疗肿瘤的方法很多，如利用外科学、放射治疗学、化学治疗、肿瘤血管阻断疗法等。其中抗血管生成是近几年肿瘤生物治疗研究的热点领域。抗肿瘤血管生成疗法具有很多优点：(1)具有高效性，破坏少量的血管可使依靠其生长的大量的肿瘤细胞发生缺血性坏死；(2)广泛的抑瘤谱，不同肿瘤的血管内皮细胞往往表达相同的特异性蛋白分子，针对这种蛋白分子的一种疗法就可能适用于多种肿瘤；(3)不易产生耐药性，肿瘤血管内皮细胞是遗传较稳定的二倍体细胞，不易变异，即使多次反复给药甚至肿瘤复发再给药也不易产生耐药；(4)药物易于到达靶细胞，血管内皮细胞直接暴露于血液中，药物能直接发挥作用；(5)无明显的毒副作用，抑制血管治疗只针对增殖中的血管内皮细胞，对静止的血管内皮细胞无明显作用。

FpAT是北京肿瘤防治研究所寿成超等在对胃癌病人血清进行蛋白指纹图谱分析中发现的一个内源性抗肿瘤小肽，通过蛋白飞行质谱技术和串联质谱的鉴定，发现其为15肽的凝血酶原片断，命名为FpAT，其结构在已申请的专利(CN101153054A、WO2008040190A1)中公开。一系列试验证实了FpAT通过抗血管生成从而对多种类型的肿瘤生长有显著的抑制作用。

FpAT的化学名称为：L-天冬氨酰-L-丝氨酰-甘氨酰-L-谷氨酰-甘氨酰-L-天冬氨酰-L-苯丙氨酰-L-亮氨酰-L-丙氨酰-L-谷氨酰-甘氨酰-甘氨酰-甘氨酰-L-缬氨酰-L-精氨酸。一级结构为H-Asp-Ser-Gly-Glu-Gly-Asp-Phe-Leu-Ala-Glu-Gly-Gly-Gly-Val-Arg-OH。结构如下式：

分子量小的小肽在代谢过程中易由肾小球滤过，通过肾小管时又易被其中的蛋白酶部分降解并从尿中排出，因而大多数小肽的半衰期较短，为维持一定的疗效需要大剂量反复用药。本发明中涉及的抗肿瘤小肽FpAT如直接使用可能需要较大的量，治疗费用高。因此，对FpAT进行化学修饰，增加其对酶或非酶环境的稳定性，改变其在人体内的生物学分布，延长其半衰期是十分必要的。

发明内容

本发明人经研究发现小肽FpAT经聚乙二醇化修饰后可延长FpAT小肽在体内的半衰期，在保持其生物活性的同时降低了小肽FpAT的用量，且具有毒副作用小，在体内作用时间长等特点。

本发明的目的之一是提供抗肿瘤小肽FpAT的聚乙二醇衍生物，其结构是在FpAT的N-端、C-端连上半胱氨酸，偶联上有马来酰亚胺基聚乙二醇、乙烯基聚乙二醇或碘代乙酰基聚乙二醇，或在FpAT的N-端氨基、C-端羧基以及其天冬氨酸或谷氨酸侧链羧基上偶联聚乙二醇。

本发明的抗肿瘤小肽FpAT的聚乙二醇衍生物为具有式(I)结构的化合物，即在FpAT的N-端、C-端连上半胱氨酸，偶联上有马来酰亚胺基聚乙二醇、乙烯基聚乙二醇或碘代乙酰基聚乙二醇修饰的化合物：

PEG-M-Cys-FpAT    (I)

其中PEG为RO(CH₂CH₂O)n-CH₂CH₂，R＝H或CH₃，n＝5-1000；Cys为半胱氨酸，它通过其侧链硫原子与M基团共价相连。

本发明的抗肿瘤小肽FpAT的聚乙二醇衍生物还为具有式(II)结构的化合物，即在FpAT的N-端、C-端连上半胱氨酸，偶联上有马来酰亚胺基聚乙二醇、乙烯基聚乙二醇或碘代乙酰基聚乙二醇修饰的化合物：

FpAT-Cys-M-PEG    (II)

式中PEG和Cys和M定义同式(I)相同。

本发明的抗肿瘤小肽FpAT的聚乙二醇衍生物还为具有式(III)结构的化合物，即在N-端氨基经PEG共价修饰的化合物：

PEG-X-(CH₂)mCO-NH-FpAT    (III)

式中PEG定义同式(I)相同；X＝O、NH或NHCO；m＝0-6。

本发明的抗肿瘤小肽FpAT的聚乙二醇衍生物还为具有式(IV)结构的化合物，即在FpAT的C-端、天冬氨酸或谷氨酸侧链羧基经PEG共价修饰的化合物：

FpAT-[CO-X-(CH₂)m-PEG]z    (IV)