[发明专利]检测Angelman综合征的基因芯片及使用方法、试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及一种生物技术领域的基因芯片及使用方法、试剂盒，具体涉及一种检测Angelman综合征的基因芯片及使用方法、试剂盒。

背景技术

Angelman综合征(Angelman syndrome，AS)，又名快乐木偶综合征，是一种基因组印记性疾病，最早由Hurry Angelman在1965年报道。该病在临床上表现为复杂的多系统异常，主要I临床症状包括小头畸形、快乐木偶样的共济失调步态、癫痫、EEG异常、过度兴奋和发作性大笑等。母源15号染色体q11-13区域的异常是导致该病发生的主要原因，目前已明确有4种分子病理机制会导致AS的发生。国外报道AS的发病率约为2.5/100000-10/100000。目前的研究表明4种明确的机制会导致Angleman综合征的发生：(1)母源染色体15q11.2-13关键区域发生4～6Mb的大片段缺失(占患儿的70％)，UBE3A基因位于这一区域痰，因此母源UBE3A基因表达缺失；(2)15号染色体父源单亲二体性(uniparental disomy，UPD，5％)，即患儿的两条15号染色体都来自父源，缺乏母源15号染色体，因此缺乏母源的UBE3A基因，而父源UBE3A基因不具有表达活性；(3)印记缺损(imprinting defect，ID，5％)，母源15q11.2-13区域呈现异常的印记状态，从而引起UBE3A基因表达出现异常；(4)母源UBE3A基因发生突变(10％)，无法正常表达。这4种机制都会间接或直接引起UBE3A基因的低表达或不表达，从而使患者产生AS特征性的临床表现。另有约10％的AS患者其致病机制尚未明确。

基于AS的发病机制不同，已建立了多种实验室诊断方法，其中MS-PCR是最主要和最常用的诊断方法。由于在AS的分子机制中，15q11-13缺失、父源单亲二倍体和印记缺陷均表现为甲基化状态的异常，涉及这3种机制的病例均可应用MS-PCR进行诊断，并且这3种机制的病例共占AS的80％，因此可首先应用MS-PCR方法对病例进行初步诊断。此外，还可以使用FISH的方法，检出率为70％。然而尚无一种快速、低成本、大通量和自动化检测Angelman综合征基因突变的方法。

比较基因组杂交(CGH)芯片分析技术是一种突破性技术，能够支持研究人员通过微阵列准确研究与疾病有关的染色体的变化。比较基因组杂交(CGH)芯片分析的原理是在一张芯片上用两份标记不同荧光素的样品(检测样品和对照样品)同时进行杂交，从而快速而又直观地检测实验样品和对照样品之间基因组DNA的拷贝数量的差异。CGH应用于疾病遗传学的研究，可以提供一个全基因组的扫描图，提示样本DNA在整个染色体组的哪个特定位置存在扩增或缺失，那些发生扩增的区域，极有可能存在致病基因，而缺失区域即可能包含一些抑制基因。因此，需要一种新的技术方案来克服现有技术的上述缺陷和不足。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供一种检测Angelman综合征的基因芯片及使用方法、试剂盒。本发明的基因芯片操作步骤简单，检测特异性高，稳定性好，时间短，成本低。本发明还提供了一种检测Angelman综合征的基因芯片的使用方法及试剂盒。

本发明的目的是通过以下技术方案实现：

第一方面，本发明提供一种检测Angelman综合征的基因芯片，包括固相载体和固定在该固相载体上的寡核苷酸探针，所述寡核苷酸探针为SEQ ID NO.1～50所示的核苷酸序列。

优选地，所述固相载体选自载玻片、硅片、硝酸纤维素膜、尼龙膜或聚苯乙烯。

第二方面，本发明还涉及前述检测检测Angelman综合征的基因芯片的使用方法，包括以下步骤：

(a)制备样品DNA片段；

(b)荧光标记上述DNA片段；

(c)洗脱上述标记产物；

(d)将标记产物与所述基因芯片杂交；

(e)扫描检测基因芯片的杂交信号，获得结果。

第三方面，本发明还涉及一种用于检测Angelman综合征的试剂盒，所述试剂盒包括权利要求1所述的基因芯片。

优选地，所述试剂盒还包括标记物，所述标记物为Cy3-dUTP。

优选地，该试剂盒还包括标记物，所述标记物为Cy5-dUTP。