[发明专利]一种用于急性冠脉综合征的液相芯片试剂盒以其制备方法

说明书

技术领域：

本发明涉及的体外试剂盒技术领域，具体地说是一种用于急性冠脉综合征的液相芯片试剂盒以其制备方法。 

背景技术：

动脉粥样硬化(atherosclerosis，AS)性血管疾病已成为威胁国人健康的″头号杀手″，随着我国经济的发展，发病率呈逐年上升趋势，我国每年用于该类疾病的医疗费用高达千亿元人民币，加强AS性血管疾病及其并发症的防治已成为我国重大疾病防治的主要任务。 

AS性血管疾病引发的急性冠脉综合征(Acute coronary syndrome，ACS)是临床最常见和最严重的表现，而冠脉易损斑块破裂继发血栓形成是其发生的最主要病理基础。目前作为冠心病诊断“金标准”的冠状动脉造影并不能很好的识别易损斑块，易损斑块的识别和诊断主要依赖于血管内超声及血管镜等介入影像学手段，可以显示血管壁的病变，精确地区别病变的性质来识别易损斑块，但却不能检测斑块中的炎症活性，更由于其为有创性检查，技术条件要求高且费用较昂贵，限制了它的推广应用。因此，寻找能反映AS易损斑块敏感而特异性的血清学标志物，并通过有效干预，在易损斑块破裂前，早期将其识别并使之趋向稳定，有望达到减少ACS发生的目的。 

但现有的诊断试剂盒多集中于借助外周血清标志物提高对ACS的诊断敏感性和特异性方面，在改善患者的危险分层和预后判断方面 的相关试剂盒还是一个空白，而这方面恰恰是目前临床患者管理所急需的。 

液相芯片技术(xMAP)也称为流式荧光技术，是一种可广泛应用于蛋白、基因、受体/配体等多种生物反应的生物芯片技术平台，主要包括微球、探针分子、被检测物和报告分子四种成分，其微球在制作过程中使用不同配比的两种红色分类荧光染料将微球(微球分为直径为5.6μm的聚苯乙烯微球和6.5μm的磁性微球，两种微球主要在后期的洗涤和适用的仪器有所不同，原理一致)染成不同的荧光色，从而获得多达100种荧光编码的微球。把针对不同待测物的抗体分子或者基因探针以共价交联的方式结合到特定的编码微球上，每个编码微球都对应相应的检测项目。先把针对不同待测物的荧光编码微球混合，然后加入待测物质或者待测的扩增片段，所形成的复合物再与标记荧光素发生结合反应。微球在流动鞘液的带动下单列依次通过红绿激光，红激光用来判定微球的荧光编码，绿激光用来测定微球上报告分子的荧光强度。从而达到快速准确的定量检测目的。由于所有反应均处在液相环境，更有利于保持蛋白质的天然构想，使探针和被检测物的反应更快更完全，因此检测灵敏度和线性范围均得到极大的提高。 

发明内容：

本发明的目的在于提供一种改进的用于急性冠脉综合征的液相芯片试剂盒以其制备方法，它可克服现有技术中诊断试剂盒多集中于借助外周血清标志物提高对ACS的诊断敏感性和特异性方面，在改善患者的危险分层和预后判断方面的相关试剂盒还是一个空白，同时现有试剂盒的制备方法复杂、稳定性差、应用效果不佳的一些不足。 

为了实现上述目的，本发明的技术方案是：一种用于急性冠脉综 合征的液相芯片试剂盒，其特征在于：所述的液相芯片试剂盒包括有以下组分： 

1)包被微球：微球主要包括两类，一种直径为5.6μm的聚苯乙烯微球和另一种6.5μm的磁性微球，上述两类微球分别包被了ox-LDL捕获抗体的微球、包被了sCD40L捕获抗体的微球、包被了MMP-9捕获抗体的微球、包被了TF捕获抗体的微球、包被了omentin捕获抗体的微球和包被了esRAGE捕获抗体的微球，上述微球分别具有不同颜色编码； 

2)生物素标记检测抗体：含有分别用生物素标记的ox-LDL、sCD40L、MMP-9、TF、omentin及esRAGE的检测抗体； 

3)链亲合素藻红蛋白。 

一种用于急性冠脉综合征的液相芯片试剂盒的制备方法，其特征在于：所述的制备方法包括有如下步骤： 

1)按照上述试剂盒的组成，制备相应的抗体包被微球： 

分别选取不同的微球，经涡旋或超声悬浮20-25秒； 

将50μl微球活化后，离心条件为≥8000g，离心1-2分钟； 

吸去上清，将微球重悬于250μl 50mM的MES的溶液中，涡旋25-30秒，超声25-30秒，离心收集活化后的微球，离心条件为≥8000g，离心1-2分钟；重复该步骤一次； 

吸去上清，将微球重悬于100μl 50mM的MES的溶液中，涡旋25-30秒，超声25-30秒，加入1μg的抗体，用50mM的MES的溶液将总体积补至500μl；经涡旋震荡混匀，室温避光振荡3小时；