[发明专利]甲基化FBP1基因的应用

说明书

技术领域

本发明涉及医药生物技术领域，具体是新抑癌基因FBP1基因DNA甲基化在制备肿瘤诊断、检测或筛查药物中的应用。

背景技术

胃癌是常见肿瘤之一。有报告显示，如果胃癌仅限于胃壁的粘膜层，5 年的生存率可达95%。然而，目前很少有胃癌患者能够在早期被发现，导致5年生存率在20%左右。因此早检查、早治疗是降低胃癌死亡率的最关键手段。

随着胃癌发病机理研究的深入，已发现多种基因异常。这些基因的改变决定着胃癌的生物学和临床行为，对这些改变的检测对于胃癌早期诊断具有重要意义，而使这些异常回复正常将是胃癌治疗的重要方向之一。

基因的表观遗传学改变是肿瘤发生的重要原因，包括DNA甲基化的丢失、获得、以及组蛋白修饰为特征的染色质结构的变化等。这些表观遗传的改变，特别是抑癌基因启动子的超甲基化引起的基因沉默，影响着肿瘤发展的各个阶段。因此，抑癌基因启动子超甲基化水平可以作为肿瘤诊断和预后的分子标记，而抑制抑癌基因启动子甲基化或使已甲基化的抑癌基因启动子去甲基化将对肿瘤的预防、治疗具有重要意义。

果糖-1,6-二磷酸作为糖酵解途径中重要的反应中间体受到果糖-6-磷酸酶和果糖-1,6-二磷酸酶（Fructose-1,6-bisphosphatase, FBP）的双重调控。已有研究表明，肿瘤细胞中果糖-6-磷酸酶水平发生上调，但FBP基因仅以在肿瘤细胞中是否也发生变化以及其对肿瘤发生、发展的作用，至今还不清楚。在哺乳动物细胞中存在两种FBP基因的同工酶，其中FBP2基因只存在于肌肉中，而FBP1基因分布更为广泛。

随着分子生物学的进展，越来越多的抑癌基因被发现和鉴定，不仅拓展了我们对肿瘤发生的认识，也为肿瘤诊治手段的开发提供了更多的机会。FBP1基因（Fructose-1,6-bisphosphatase-1）（Genbank No. NM_000507），与肿瘤的关系尚不清楚，有待进一步研究。

发明内容

本发明旨在以FBP1基因的 DNA甲基化为基础的检测手段，提供甲基化FBP1基因在制备肿瘤诊断、检测或筛查药物中的应用。

为实现发明目的，发明人提供如下技术方案：

甲基化FBP1基因在制备肿瘤诊断、检测或筛查药物中的应用。

本发明从实验得知，FBP1基因在肿瘤细胞以及肿瘤组织中特异性低表达，这是因为其启动子区DNA发生了肿瘤特异性的高甲基化。逆转该基因的DNA甲基化，可以恢复FBP1基因在肿瘤细胞中的表达。

发明人和其他研究者都发现在胃癌和胃增生组织中有很多肿瘤相关的基因因为启动子的超甲基化而产生转录静默，FBP1 基因是发明人研究发现的其中一个新的基因，因FBP1基因启动子的超甲基化而在胃癌细胞系中低表达，而且在胃癌细胞系中表达外源FBP1基因后可以显著抑制细胞的增殖，同时发明人也在胃癌和胃增生组织中也证实FBP1基因启动子甲基化水平明显高于正常组织。以上实验都表明FBP1基因是一个抑癌基因，其启动子的甲基化水平可以作为胃癌早期诊断的生物标记物。

作为优选，根据本发明所述的甲基化FBP1基因在制备肿瘤诊断、检测或筛查药物中的应用，其中，所述的肿瘤诊断、检测或筛查方法中至少包括一对特异扩增FBP1基因甲基化的引物，所述的引物由上游引物和下游引物组成，其中，所述的上游引物（FBP1 MSP-F）具有如SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列；下游引物（FBP1 MSP-R）具有如SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列。

作为优选，根据本发明所述的甲基化FBP1基因在制备肿瘤诊断、检测或筛查药物中的应用，其中，所述的肿瘤诊断、检测或筛查方法是以FBP1基因的DNA甲基化为基础的检测手段，所述的检测手段包括MSP法和BGS法。

通过对FBP1基因mRNA的核酸序列分析，发明人发现在它的启动子区存在一个经典的CpG岛（CGI）（图2 ），序列分析的标准如下：GC含量>55%，ObsCpG/ExpCpG> 0.65， 长度大于500个碱基。因此我们采用甲基化特异性PCR（MSP）和亚硫酸盐处理后的基因组测序（BGS）来进一步验证FBP1基因启动子的甲基化。

作为优选，根据本发明所述的甲基化FBP1基因在制备肿瘤诊断、检测或筛查药物中的应用，其中，所述的肿瘤诊断、检测或筛查方法以FBP1基因甲基化分析为基础。

作为优选，根据本发明所述的甲基化FBP1基因在制备肿瘤诊断、检测或筛查药物中的应用，其中，所述的肿瘤包括但不限于胃癌肿瘤。