[发明专利]特异性检测鲑科鱼类的实时荧光PCR试剂盒及检测方法

权利要求书

1.一种用于特异性检测鲑科鱼类的PCR检测引物，其特征在于：所述引物序列包括：SEQ ID NO.1或2所示的上游引物、SEQ ID NO.3所示的下游引物。

2.一种用于特异性检测鲑科鱼类的PCR检测探针，其特征在于：所述探针序列包括：SEQ ID NO.4所示的荧光探针。

3.一种特异性检测鲑科鱼类的实时荧光PCR试剂盒，包括：PCR缓冲液、dNTP和DNA聚合酶，其特征在于：还包括SEQ ID NO.1或2所示的上游引物、SEQ ID NO.3所示的下游引物、SEQ ID NO.4所示的荧光探针。

4.如权利要求3所述的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒还包括SEQ ID NO.5所示的马苏大麻哈鱼生长激素基因DNA标准品。

5.如权利要求3或4所述的试剂盒应用于特异性检测和鉴定鲑科鱼类。

6.一种特异性检测鲑科鱼类的荧光PCR检测方法，其特征在于，包括步骤：

(1)提取待测样本DNA；

(2)采用如权利要求3所述的PCR试剂盒，对样本DNA和阴性对照样品，进行实时荧光PCR反应，并进行荧光检测；

(3)选择FAM荧光检测模式，基线调整取3～15个循环的荧光信号，以阈值线刚好超过正常阴性对照样品的最高点设定阈值线；若待测样品荧光增长曲线超过阈值线，并呈良好的对数增长，则判断为阳性。

7.如权利要求6所述的方法，其特征在于：所述步骤(2)中的阴性对照样品，为非鲑科鱼类DNA样本。

8.如权利要求6所述的方法，其特征在于：所述方法还包括：

以梯度浓度的马苏大麻哈鱼生长激素基因DNA标准品溶液在与样品DNA相同条件下，进行PCR扩增反应，以DNA标准品溶液浓度的对数值为横坐标、标准品Ct值为纵坐标绘制标准曲线；根据样品DNA测得的Ct值，对照标准曲线，获得样品DNA的浓度。

9.如权利要求6所述的方法，其特征在于：所述步骤(2)中的PCR反应条件为：50℃2分钟，95℃10分钟；进入循环，95℃15秒、60℃60秒，进行45个循环扩增。