[发明专利]一种具有三螺旋结构的活性胶原的制备方法

权利要求书

1.一种具有三螺旋结构的活性胶原的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：原料预处理、除脂、酸酶结合处理、超声波处理、H₂O₂溶液处理、酸溶盐析纯化、透析纯化、干燥。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述的原料为选自新鲜猪皮、牛皮、牛跟腱中的一种。

3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述的酸酶结合处理为：经过预处理的原料浸入0.6～0.7mol/L冰醋酸和600～700mg/L胃蛋白酶的混合液中，持续搅拌25～30小时左右。

4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述的超声波处理优选采用渐进式超声波处理，先使用100～200W超声处理30分钟，再使用200～300W超声处理30分钟，最后使用300～400W超声处理1小时。

5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，具体步骤如下：

(1)取新鲜猪皮，切割清除油脂层和毛皮层，去除杂质，清洗，将猪皮破碎成小颗粒状，按照固液比1∶30～1∶40的比例，加入0.01～0.03mol/L的氢氧化钠水溶液，于6～8℃浸泡1～2小时，过滤，备用。

(2)在上述预处理后的猪皮中加入质量为猪皮质量6～8倍的无水乙醚或者丙酮，于35～40℃回流5-8小时，之后用蒸馏水冲洗至无异味，备用。

(3)将上述猪皮浸入0.6～0.7mol/L冰醋酸和600～700mg/L胃蛋白酶的混合液中，持续搅拌25～30小时左右。

(4)对上述混合物采用渐进式超声波处理，先使用100～200W超声处理30分钟，再使用200～300W超声处理30分钟，最后使用300～400W超声处理1小时。

(5)加入2～3％的H₂O₂溶液，混合静置2～4小时，调节pH至5.0，离心。

(6)取上清液，加入NaCl，搅拌20-30小时，离心，沉淀物加入0.6-0.7moL/L冰醋酸溶解，离心，取上清液，调节pH至7.5，加入NaCl，搅拌20-30小时，离心。

(7)将步骤(6)得到的沉淀物溶解于0.6～0.7moL/L冰醋酸，先以0.6～0.7moL/L的冰醋酸为透析外液透析2次，每次4小时，再以蒸馏水为透析外液透析5～7次，每次4小时，至外液检测不到氯离子，得到胶原液体。

(8)将上述液体冷冻干燥，得到具有三螺旋结构活性的胶原。