[发明专利]霍乱弧菌毒素基因多重实时荧光定量PCR检测试剂盒及方法

权利要求书

1.一种霍乱弧菌毒素基因多重实时荧光定量PCR检测试剂盒，主要包括特异性引物和探针以及PCR反应试剂，其特征在于，所述特异性引物和探针由霍乱毒素A亚单位基因(ctxA)、辅助霍乱肠毒素基因(ace)和小带联结毒素基因(zot)的特异性引物和探针组成：

ctxA上游引物F1：5′-AAC GTT AAT GAT GTA TTA GGG GCA T-3′

ctxA下游引物R1：5′-GTT ACT GTAATA TCT ATC TCT GTA G-3′

ctxA探针P1：5′(HEX)-ATA CTC CCA AAT ATA TGG ATG GT-(BHQ1)-3′

ace上游引物F2：5′-GGA GAT GTC CCA GAAAGT GAT TG-3′

ace下游引物R2：5′-CGG GTC ATC AAA GCC TGAAG-3′

ace探针P2：5′-(FAM)-TGC TGC CTC CTC AAT ACA GCG 

GCT-(BHQ1)-3′

zot上游引物F3：5′-CAC CAC GGC TGG GAT ATC TG-3′

zot下游引物R3：5′-CTATCT CCG CCG CCT CTC T-3′

zot探针P3：5′-(Cal610)-CAC GCC TAA CAT TGC CAA AGT 

GCA-(BHQ2)-3′

其中FAM、HEX和Cal610为不同波长的荧光报告基团，BHQ1和BHQ2为荧光淬灭基团。

2.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于所述试剂盒还包括霍乱毒素A亚单位基因(ctxA)、辅助霍乱肠毒素基因(ace)和小带联结毒素基因(zot)的标准品，所述标准品序列如下：

ctxA标准品：aacgttaatg atgtattagg ggcatacagt cctcatccag atgaacaagaagtttctgct ttaggtggga ttccatactc ccaaatatat ggatggtatc gagttcatttt ggggtgcttga tgaacaatta catcgtaata ggggctacag agatagatat tacagtaac

ace标准品：ggagatgtcc cagaaagtga ttgatatgtt taccatctat ccgcttatcc aacaggctat cgatatgctg cctcctcaat acagcggctt tctgttcttt ttagggttag accaagcgct ggctatcgtg cttcaggctt tgatgacccg

zot标准品：caccacggc tgggatatct gcctaaccac gcctaacattgccaaagtgc acaacatgat aagagaggcg gcggagatag。