[发明专利]可裂解连接单元及其合成方法与用途

权利要求书

1.一种可裂解连接单元，其特征在于，其结构式为：

，

其中，n为1或2，m为0～20中的任意一个整数，k为1～20中的任意一个整数。

2.一种根据权利要求1所述的可裂解连接单元在DNA合成测序中的用途，其特征在于，所述可裂解连接单元连接核苷酸和荧光素，用于DNA合成测序。

3.一种根据权利要求1所述的可裂解连接单元的合成方法，其特征在于，

当n = 1时，包括以下合成步骤：

a、T-1的合成：以L-谷氨酸为原料，加入盐酸，在冰浴搅拌下滴加亚硝酸钠溶液，滴加完毕后，继续在冰浴下反应3～5h，然后移至室温下过夜；反应结束后，减压蒸去水，加入乙酸乙酯溶解，过滤，滤液用无水硫酸钠干燥，过滤，旋干溶剂得T-1；

b、T-2的合成：取T-1,以无水四氢呋喃做溶剂，氮气保护，在冰水浴下缓慢滴加硼烷/二甲硫醚溶液，滴加完毕后，继续在室温下反应4～5h；反应结束后，加入甲醇淬灭反应，旋去溶剂，再加入甲醇，旋干得T-2；

c、T-3的合成：取T-2，以二氯甲烷做溶剂，加入咪唑，氮气保护下和二甲基叔丁基氯硅烷在室温下反应17～20h；反应结束后，加入二氯甲烷稀释，分别用2mol/L盐酸、水和饱和碳酸氢钠洗涤反应液，无水硫酸钠干燥，旋干，柱层析得T-3纯品；

d、T-4的合成：以二氯甲烷做溶剂，T-3在氮气保护及冰盐浴下和二异丁基氢化铝反应，TLC跟踪至反应完全. 反应结束后，加入0.2mol/L HCl淬灭反应，二氯甲烷萃取，有机相用饱和碳酸氢钠水溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，旋转蒸发除去溶剂得T-4；

e、T-5的合成：以二氯甲烷做溶剂，T-4在氮气保护和冰盐浴下，加入三乙胺，然后和甲磺酰氯反应30～50min，在40～50℃回流3～5h，反应结束后，二氯甲烷稀释，水洗，无水硫酸钠干燥，旋干，柱层析得T-5；

f、T-6的合成：以二氯甲烷做溶剂，T-5在对甲苯磺酸吡啶盐作用下和原料A在室温下反应，TLC跟踪至反应完全，反应结束后，旋干溶剂，加入水，用乙酸乙酯萃取，饱和食盐水洗涤有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，旋干，柱层析得到T-6纯品；所述原料A的结构式为：

，其中，m为0～20中的任意一个整数，k为1～20中的任意一个整数；

    g、T-7的合成：以四氢呋喃做溶剂，在四丁基氟化胺作用下，T-6在室温下脱羟基保护，TLC跟踪至反应完全，反应结束后，旋干溶剂，柱层析得到T-7；

    h、T-8的合成：把T-7溶于过量的氨水，室温下反应，TLC跟踪至反应完全，反应结束后，加乙醇，减压旋去溶剂，得T-8，T-8即所述可裂解连接单元；

当n = 2时，包括以下合成步骤：

    a、X-1的合成：以N,N-二甲基甲酰胺做溶剂，2-羟基-3，4-二氢吡喃在NaH的作用下，和氯化苄在室温下反应，TLC跟踪至反应完全，反应结束后，滴加水除去未反应的NaH，用乙酸乙酯萃取，有机相分别用水、饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，减压旋去溶剂，柱层析得X-1；

b、X-2的合成：以二氯甲烷做为溶剂，把原料A溶于二氯甲烷，在对甲苯磺酸吡啶盐作用下，和X-1在室温下反应，TLC跟踪至反应完全，反应结束后，减压旋去溶剂，之后加入水，用乙酸乙酯萃取，有机相分别用水、饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，减压旋去溶剂，柱层析得X-2；所述原料A的结构式为：

，其中，m为0～20中的任意一个整数，k为1～20中的任意一个整数；

    c、X-3的合成：以乙酸乙酯做溶剂，把X-2溶于乙酸乙酯，加入Pd/C并通入氢气，室温下反应，TLC跟踪至反应完全，反应结束后，过滤，减压旋去溶剂，得X-3；

d、X-4的合成：把X-3溶于过量的氨水，室温下反应，TLC跟踪至反应完全，反应结束后，加乙醇，减压旋去溶剂，得X-4，X-4即所述可裂解连接单元。

4.根据权利要求3所述的可裂解连接单元的合成方法，其特征在于，当n = 1时，步骤a中所述盐酸为6 mol/L，加入的所述L-谷氨酸、盐酸和亚硝酸钠的摩尔比为1：2～2.5：1.5～2。

5.根据权利要求3所述的可裂解连接单元的合成方法，其特征在于，当n = 1时，步骤b中加入的所述T-1和硼烷的摩尔比为1：1.1～1.5。