[发明专利]一种适用于吡喃糖氧化酶法测定血清1,5-脱水葡糖醇的高浓度葡萄糖清除方法及试剂盒

权利要求书

1.一种适用于吡喃糖氧化酶法测定血清1，5-脱水葡糖醇的高浓度葡萄糖清除方法，其特征在于：配制pH6.0-9.0的2-玛啡琳乙基磺酸(MES)缓冲液，其中含有一定量的葡萄糖激酶(GK)、葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)、烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADP)、丙酮酸激酶(PK)、磷酸烯醇式丙酮酸盐(PEP)和ATP，加入含葡萄糖(Glu)的血清样本，在ATP存在下，GK将Glu转化为葡萄糖-6-磷酸(G6P)，同时生成二磷酸腺苷(ADP)；在NADP+存在下，G6PD进一步把G6P转化为6-磷酸葡萄糖内酯(G6PL)；反应中生成的ADP在PEP的存在下经PK作用重新转化为ATP。

2.根据权利要求1所述的一种适用于吡喃糖氧化酶法测定血清1，5-脱水葡糖醇的高浓度葡萄糖清除方法，其特征在于：用于实现上述方法的葡萄糖清除试剂的主要物质为2-玛啡琳乙基磺酸(MES)缓冲液、葡萄糖激酶(GK)、葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)、烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADP)、丙酮酸激酶(PK)、磷酸烯醇式丙酮酸盐(PEP)和三磷酸腺苷(ATP)组合。

3.根据权利要求1所述的一种适用于吡喃糖氧化酶法测定血清1，5-脱水葡糖醇的高浓度葡萄糖清除方法，其特征在于：测试温度控制在20-50℃，时间控制在3-5分钟，血清样本和葡萄糖清除试剂的体积比控制在1/10-1/200。

4.根据权利要求2所述的一种适用于吡喃糖氧化酶法测定血清1，5-脱水葡糖醇的高浓度葡萄糖清除方法，其中葡萄糖清除试剂的主要物质的最适浓度为：pH6.0-9.0MES缓冲液为20-2000mmol/L、GK为1-50KU/L、G6PD为5-200KU/L、NADP为5-60mmol/L、PK为0.5-20KU/L、PEP为1-3mmol/L、ATP为0.2-2mmol/L、血清样本中的Glu为0-60mmol/L。

5.一种适用于吡喃糖氧化酶法测定血清1，5-脱水葡糖醇的高浓度葡萄糖清除的试剂盒，该试剂盒含有pH6.0-9.0的2-玛啡琳乙基磺酸(MES)缓冲液，该缓冲液包含一定量的葡萄糖激酶(GK)、葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)、烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADP)、丙酮酸激酶(PK)、磷酸烯醇式丙酮酸盐(PEP)和ATP。

6.权利要求5所述的试剂盒，其中各组分的最适浓度为：pH6.0-9.0MES缓冲液为20-2000mmol/L、GK为1-50KU/L、G6PD为5-200KU/L、NADP为5-60mmol/L、PK为0.5-20KU/L、PEP为1-3mmol/L、ATP为0.2-2mmol/L、血清样本中的Glu为0-60mmol/L。