[发明专利]啤酒花潜隐类病毒的实时荧光RT-PCR检测试剂及检测方法有效
| 申请号： | 201110319087.5 | 申请日： | 2011-10-20 |
| 公开（公告）号： | CN102382903A | 公开（公告）日： | 2012-03-21 |
| 发明（设计）人： | 郭立新;段维军;闻伟刚 | 申请（专利权）人： | 中华人民共和国北仑出入境检验检疫局;宁波检验检疫科学技术研究院 |
| 主分类号： | C12Q1/70 | 分类号： | C12Q1/70;C12Q1/68;C12R1/94 |
| 代理公司： | 宁波奥圣专利代理事务所(普通合伙) 33226 | 代理人： | 程晓明 |
| 地址： | 315800 浙江*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 啤酒花 潜隐 类病毒 实时 荧光 rt pcr 检测 试剂 方法 | ||
1.啤酒花潜隐类病毒的实时荧光RT-PCR检测试剂，包含一对特异性引物和一条特异性荧光探针，扩增目标片段长度为61bp，其特征在于引物和探针序列为：
引物HLV-F： 5'-CGTGGAACGG CTCCTTCTT-3'；
引物HLV-R：5'-AGAGTTGTAT CCACCGGGTA GTTT-3'；
探针HLV-P：5'-CACCAGCCGG AGTT-3'，该探针的5'端含有FAM报告荧光染料，3'端为含有不发荧光的淬灭基团并具有MGB分子；扩增目标片段的核苷酸序列如SEQ ID NO：4所示。
2.利用权利要求1所述的啤酒花潜隐类病毒的实时荧光RT-PCR检测试剂检测啤酒花潜隐类病毒的方法，其特征在于使用RNA提取试剂盒对啤酒花进行植物总RNA提取，具体操作见试剂盒说明书；以提取样品总RNA为模板，进行实时荧光RT-PCR反应，25μL反应体系中Mg2+终浓度为5.5mM、引物HLV-F和HLV-R的终浓度都为0.7μM、探针HLV-P终浓度为0.5μM，12.5μL 2xQuantiTect Probe RT-PCR Master Mix，0.25μL QuantiTect RT Mix；反应条件为：50℃ 30 min；95℃ 15 min；然后94℃ 15 s，60℃ 60 s，共40个循环；若检测到荧光信号则为啤酒花潜隐类病毒。
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