[发明专利]检测2型糖尿病易感基因7个位点突变的基因芯片及其制作方法及试剂盒

权利要求书

1.一种检测2型糖尿病易感基因7个位点突变的基因芯片，其特征在于，包括固相载体、固定在固相载体上的用于检测2型糖尿病易感基因的特异性寡核苷酸探针，探针的核苷酸序列如SEQ ID No.1～14所示，所述固相载体为硝酸纤维素膜或尼龙膜。

2.如权利要求1所述的检测2型糖尿病易感基因7个位点突变的基因芯片，其特征在于，所述基因芯片的点阵布控：膜芯片为96个样点组成的6行×16列的矩阵，包括质控系统和检测系统，其中，质控系统为：

(1)芯片阳性对照，为SEQ ID No.1～14探针的等量混合的25uM溶液，作为设计布控于左上、右上、右下三个角，作为阳性对照样点，共12个阳性对照样点；

(2)芯片平行对照，采用25uM的探针溶液点样，各探针平行点4个点，即每4个点检测一个等位基因型，上下共8个点，共同构成一个基因位点检测区；

(3)芯片阴性对照，为5×SSC，共4个阴性对照样点，位于每个基因位点检测区之间。

3.如权利要求1所述的检测2型糖尿病易感基因7个位点突变的基因芯片，其特征在于，探针3’端具有15个多聚T，并经氨基基团修饰。

4.一种检测2型糖尿病易感基因7个位点突变的基因芯片的制作方法，其特征在于，包括如下步骤：

1)对硝酸纤维素膜或尼龙膜进行预处理，形成固相载体；

2)用芯片点样仪将稀释好的用于检测2型糖尿病易感基因的特异性寡核苷酸探针印点到固相载体上，探针的核苷酸序列如SEQ ID No.1～14所示。

5.如权利要求4所述的检测2型糖尿病易感基因7个位点突变的基因芯片的制作方法，其特征在于，步骤1)中的预处理为：将硝酸纤维素膜或尼龙膜浸入灭菌双蒸水中浸泡8min～12min，再浸入5×SSC 24min～34min，而后取出并风干，4℃保存备用。

6.如权利要求4所述的检测2型糖尿病易感基因7个位点突变的基因芯片的制作方法，其特征在于，探针采用如下方式制备：合成探针，探针在合成时3’端合成15个多聚T，并经氨基基团修饰，而后用20×SSC-Buffer作为稀释液稀释至终浓度为15μM。

7.如权利要求4所述的检测2型糖尿病易感基因7个位点突变的基因芯片的制作方法，其特征在于，步骤2)具体为：采用478A芯片点样仪将所述用于检测2型糖尿病易感基因的特异性寡核苷酸探针点印于处理好的固相载体上，然后用紫外光照射8min，使之交联固定，4℃保存备用。

8.如权利要求4所述的检测2型糖尿病易感基因7个位点突变的基因芯片的制作方法，其特征在于，探针印点到固相载体后，还包括对固定有探针的固相载体进行洗涤的步骤，具体为：室温下含2×SSC-0.1％SDS洗涤溶液中振动洗涤5min×2次，含0.5×SSC-0.1％SDS洗涤溶液中振动洗涤15min。

9.一种试剂盒，其特征在于，包括如权利要求1～3任一项所述的检测2型糖尿病易感基因7个位点突变的基因芯片。

10.如权利要求9所述的试剂盒，其特征在于，还包括用于扩增易感基因位点所在区域的引物，引物序列为SEQ ID No.15～28所示的寡核苷酸，所扩增区域为SEQ ID No.29～35所示。

11.根据权利要求9所述的试剂盒，其特征在于，还包括以下试剂中的一种或多种：杂交液、封闭液、PCR缓冲液、dNTPs、DNA聚合酶、MgCl₂。