[发明专利]一种布鲁氏菌菌壳及其制备方法和应用无效
| 申请号： | 201110293497.7 | 申请日： | 2011-09-30 |
| 公开（公告）号： | CN102352338A | 公开（公告）日： | 2012-02-15 |
| 发明（设计）人： | 刘军;刘爽;冯书章 | 申请（专利权）人： | 中国人民解放军军事医学科学院军事兽医研究所 |
| 主分类号： | C12N1/21 | 分类号： | C12N1/21;C12N15/33;C12N15/63;A61K39/10;A61P31/04 |
| 代理公司： | 北京集佳知识产权代理有限公司 11227 | 代理人： | 逯长明 |
| 地址： | 130122 吉林省长春市净*** | 国省代码： | 吉林;22 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 布鲁氏菌 及其 制备 方法 应用 | ||
1.一种布鲁氏菌菌壳的制备方法，其特征在于，包括：
步骤1、将如SEQ ID NO：1所示核苷酸序列的裂解基因E克隆到质粒pBV220中，得到重组质粒pBV220::E；
步骤2、用如SEQ ID NO：2所示核苷酸序列的正向引物BRU1和如SEQ ID NO：3所示核苷酸序列的反向引物BRU2扩增重组质粒pBV220::E，将扩增后的产物连接到质粒pBBR1MCS-2中SpeI和SalI酶切位点之间，得到重组质粒pBBR1MCS-2-E；
步骤3、重组质粒pBBR1MCS-2-E转化到布鲁氏菌菌株中得到重组菌株，将重组菌株在25-30℃进行繁殖培养至其OD600值为0.8-1.2后迅速升温至37-45℃进行诱导培养至其OD600值稳定，然后离心收集菌体，洗涤后用高渗溶液冻融即得。
2.根据权利要求1所述制备方法，其特征在于，步骤1所述裂解基因E由以下方法制备：
用如SEQ ID NO：4所示核苷酸序列的正向引物LE-F和如SEQ ID NO：5所示核苷酸序列的反向引物LE-R从噬菌体PhiX174中扩增得到裂解基因E。
3.根据权利要求1所述制备方法，其特征在于，步骤3所述转化为电转化。
4.根据权利要求1所述制备方法，其特征在于，步骤3所述布鲁氏菌菌株为布鲁氏菌S2菌株、布鲁氏菌M5菌株、布鲁氏菌RB51菌株或布鲁氏菌104M菌株。
5.根据权利要求1所述制备方法，其特征在于，步骤3所述繁殖培养温度为28℃。
6.根据权利要求1所述制备方法，其特征在于，步骤3所述诱导培养温度为42℃。
7.根据权利要求1所述制备方法，其特征在于，步骤3所述高渗溶液为5％氯化钠溶液。
8.由权利要求1-7任意一项所述制备方法制备的布鲁氏菌菌壳。
9.权利要求8所述布鲁氏菌菌壳在制备预防布鲁氏菌病的疫苗中的应用。
10.根据权利要求9所述应用，其特征在于，所述疫苗包括有效量的权利要求7所述布鲁氏菌菌壳和医药学上可接受载体。
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