[发明专利]降钙素原B细胞表位肽段及其单克隆抗体的应用

说明书

技术领域

本发明涉及免疫分析医学领域，特别涉及细胞表位肽段抗原及其单克隆抗体的应用。 

背景技术

细菌性感染只要能够早期发现、早期诊断、针对性的早期治疗，大多预后良好。否则，可能发展成为重度菌血症或/和严重脓毒症。根据美国CDC的报告，目前脓毒症已经成为非心脏ICU死亡的主要原因（N Engl J Med.2003;348: 1546-1554），因此感染性炎症的早期诊断极为重要。另外，随着细菌耐药性、重症感染患者的增加，如何指导临床用药也显得愈发重要。 

降钙素原（procalcitonin，PCT）是上世纪九十年代才发现的细菌、真菌性感染的特异性标志物，是一种无激素活性的降钙素前肽，有116个氨基酸组成，1～57为 N-残端，60～91为降钙素，96～116为降钙蛋白。分子量为13kD，由位于11号染色体 (11p1514) 上的CALC-1基因编码，半衰期为25～30小时，在体内外稳定性好，不会降解为降钙素，亦不受体内激素水平的影响，实验室检测快速简便，有利于临床特别是急诊广泛开展应用。 

在严重全身性细菌、真菌、寄生虫、急性疟疾感染、系统炎性反应综合症（SIRS）、多器官功能衰竭综合症（MODS）的诊断方面，PCT是一个具有高灵敏度、特异性的新指标。PCT主要是在细菌毒素和炎性细胞因子的刺激下产生，而在非感染性炎症状态下血清PCT一般不升高，感染性炎症过程中，PCT的生成非常快，对内毒素刺激反应2～6小时内即升高，严重全身感染者血PCT在24 h内可升高达1000倍。PCT作为一种新的感染性炎性标志物目前已被广泛认可。不仅能早期鉴别细菌与非细菌感染，更是败血症的预警和诊断指标，且PCT与细菌感染的程度成正相关，它的上升或下降直接反应疾病恶化或好转的趋势，因此，PCT的检测在细菌性感染、败血症、MODS的鉴别诊断、预后判断、疗效观察及合理指导应用抗菌药等均有重要参考价值。 

现有技术对PCT的制备方法多直接取自组织细胞，如甲状旁腺组织，成本高，制备过程复杂，获得产品量低，制约了对PCT的研究及应用开发。利用基因工程方法制备PCT重组蛋白是一种简单、经济、可靠的方法，可大量制备PCT蛋白，并且在此基础上可进一步制备抗PCT抗体，以进行PCT免疫检测。免疫检测的首要关键问题是如何获得特异性针对PCT的抗体，而且最好获得针对不同抗原决定簇的特异性抗体，所以进行预测选择PCT的B细胞免疫表位尤为重要。目前还没有相应的研究。 

发明内容

本发明的目的之一在于提供降钙素原B细胞表位肽段及其衍生物及其衍生物，其能作为降钙素原单克隆抗体的抗原。本发明的目的之二在于提供一种杂交瘤细胞，其能特异性的分泌降钙素原单克隆抗体。同时，本发明还提供所述一种单克隆抗体，其可作为加检测降钙素原的试剂。 

为实现上述目的，本发明的技术方案为： 

1、降钙素原B细胞表位肽段，降钙素原B细胞表位肽段的氨基酸序列如SEQ ID NO:3所示。

2、含有1所述的降钙素原B细胞表位肽段的衍生物，所述的降钙素原B细胞表位肽段的衍生物为所述降钙素原B细胞表位肽段偶联有载体蛋白BSA或KLH。 

3、根据2所述的的降钙素原B细胞表位肽段的衍生物，所述的降钙素原B细胞表位肽段在N末端引入半胱氨酸。 

4、1-3任一项所述的降钙素原B细胞表位肽段制备的单克隆抗体杂交瘤细胞。 

5、根据4所述的单克隆抗体杂交瘤细胞，单克隆抗体的杂交瘤细胞的生物保藏号为CCTCC NO：C201136。 

6、5所述的单克隆抗体的杂交瘤细胞分泌的单克隆抗体。 

本发明的目的还在于提供上述单克隆抗体的制备方法，该方法操作简单，适用于大规模生产该单克隆抗体。 

为实现上述目的，本发明的技术方案在于： 

所述的单克隆抗体的制备方法：用如SEQ ID NO:3所示氨基酸序列的降钙素原B细胞表位肽段为抗原，免疫所得的血清效价大于1:3200的动物的脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合，经筛选克隆获得分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株，所述杂交瘤细胞株分泌得单克隆抗体。

本发明的另一目的在于提供所述单克隆抗体的应用，该应用为检测降钙素原提供了新思路。 

为实现上述目的，本发明的技术方案在于： 

所述的单克隆抗体在制备用于检测降钙素原的诊断试剂中的应用。

进一步，所述单克隆抗体与PCT重组蛋白的特异性多克隆抗体联合用于制备检测降钙素原的诊断试剂中的应用。