[发明专利]一种卵黄抗体微囊制剂的制备方法及用途

说明书

技术领域：

本发明涉及治疗、预防轮状病毒感染生物新药的制备以及开发，特别是抗轮状病毒卵黄抗体微囊制剂的制备方法及用途。

背景技术：

腹泻病是我国儿童的高发病，约占儿科总住院人数的12％～24％，其中8～12月以轮状病毒引起的秋季腹泻为主。应用抗轮状病毒鸡卵黄免疫球蛋白(IgY)治疗轮状病毒性肠炎，为采用被动免疫保护及治疗轮状病毒性肠炎提供了一条新途径。但迄今为止，注射仍然是这类药物临床应用的唯一给药途径，存在突出问题是：●药物在血液中半衰期短，需长期频繁注射，造成患者在身体、精神、经济上的极大负担，患者治疗依从性差；●注射剂型生产条件苛刻，需严格控制热源、内毒素等指标，造成工艺复杂，生产成本高；●由于无载体保护，药物贮运条件苛刻，贮运成本高等，这些问题最终会限制IgY抗体药物产品的品种与市场。因此，发展该药物非注射给药途径是当前国内外医药界共同关注的重大课题，也是世界性难点。可能的非注射给药途径有吸入给药、粘膜给药、眼部给药、口服给药等。其中，口服给药因方便、安全而成为国际抗体药物的发展前沿，但面临的重大难题是：●药物直接口服易被胃酸及消化道酶降解；●作为水溶大分子，药物释放难以控制。

针对上述难题，目前采取的研究对策有：●添加蛋白酶抑制剂；●肠溶包衣；●结肠给药；●微囊载体等。其中，生物微囊技术可能是实现蛋白质药物口服给药最有希望的解决途径。生物微囊技术是由天然或合成的高分子材料通过生物材料相互作用，制备成微囊这种多单元剂型，延长与胃肠道的接触时间，从而达到缓慢释放的目的；微囊膜具有选择通透特性，可控制不同分子的释放；保护微囊内生物分子的酶解、酸碱降解。理论分析及实践表明，在小肠，粒径≤10μm颗粒性物质可通过约占小肠面积25％的集合淋巴小结(即peyer’s小结)快速吸收入血。peyer’s小结中，微皱折细胞(即M细胞)是吸收转运微粒的功能细胞。当微粒在肠腔被M细胞内吞后，通过囊性转运方式被转运到M细胞基底面凹腔释出，经淋巴管进入胸导管，再汇总到上腔静脉，进入体循环。因此，如果将IgY药物包封在粒径≤10μm的微球载体中，既能保护药物在口服途径中不被降解，还能携带药物通过小肠上皮吸收屏障。

针对上述问题，本项目利用家禽受到外来抗原(细菌、病毒等微生物)的刺激会产业免疫应答并生成相应抗体且抗体主要沉积在鸡蛋的蛋黄中这一特点，以产蛋母鸡作为生物反应器，大量、连续的产业化生产卵黄免疫球蛋白，为生产无公害、无污染的保健食品、生物制品和药物提供源头材料。同时针对抗轮状病毒鸡卵黄免疫球蛋白口服给药面临的重大难题(消化道酶屏障及酸屏障)，结合中科院大连化学物理研究所天然多糖基生物微囊技术在有效屏蔽消化道酶、释放控制、黏附可控性方面优势：●壳聚糖、海藻酸钠来源广、成本低，符合载药微囊规模化研发需求；●改性壳聚糖、海藻酸钠能在全生理条件下快速形成微球控释膜，实验表明该膜能截留胃蛋白酶、胰蛋白酶，而微球中药物能通过膜控制释放；同时，该膜能保护生物质免受胃酸破坏(例与游离状态相比，微囊化酵母细胞GS115在胃酸中存活率可提高200倍以上)，进行IgY口服制剂的研究，为实现IgY口服制剂的产品性能提升提供技术支撑。

发明内容：

本发明的目的是要提供一种安全、可靠、经济简便、易于推广适用面广的针对轮状病毒的卵黄IgY抗体微囊制剂及其制备方法与应用。

一种卵黄抗体微囊制剂的制备方法及用途，它是由轮状病毒制备的疫苗，注射到健康产卵的雌禽体内，经此免疫后，取卵黄经除菌、分离提取，纯化得到抗轮状病毒的IgY制剂或将含多种轮状病毒的IgY抗体制剂按比例混合，将混有IgY抗体的海藻酸盐溶液以液滴的方式加入到壳聚糖的混合液中，制备成凝胶态的AP微囊，即抗轮状病毒卵黄抗体微囊制剂。

一种卵黄抗体微囊制剂的制备方法及用途，其微囊结构分为微囊膜与内核心部分：其中，微囊膜由海藻酸盐、壳聚糖形成的聚电解质复合水凝胶膜；内核为含有IgY抗体的海藻酸盐液体环境。

一种卵黄抗体微囊制剂的制备方法及用途，其微囊膜由海藻酸盐、壳聚糖两种高分子材料通过聚电解质络合反应形成水凝胶膜。抗体微囊的制备方法如下步骤：

(1)包埋有纯化IgY的海藻酸盐凝胶微球，称之为A微球；

(2)将步骤(1)中的A微球以液滴的方式加入壳聚糖溶液中，将壳聚糖用于海藻酸盐胶囊缓释的包被膜，A微球与壳聚糖溶液体积比例同为1∶1～1∶40，反应1～60分钟，反应温度在0～37℃，此时得到AP微囊取出用生理盐水洗涤。

一种卵黄抗体微囊制剂的制备方法及用途，其微囊产品的膜成分中的海藻酸盐为海藻酸的钾盐或钠盐。