[发明专利]一种抑制血管紧张素转移酶的六肽及其制备方法

权利要求书

1.一种抑制血管紧张素转移酶的六肽，其特征在于：该六肽的氨基酸序列为苏氨酸-脯氨酸-苏氨酸-谷氨酰胺-谷氨酰胺-丝氨酸。

2.权利要求1所述的六肽的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）将干酵母粉和水按固液比1: 5~1: 15 w/v混合后加入酶进行酶解，所述酶为内切酶、外切酶及风味酶的混合物，三种酶所占比例依次为10~30%wt、10~30%wt和40~80%wt，酶解温度为20~45℃，酶解时间为2~4h；步骤（1）得到的酶解液在90~110℃灭酶后，过滤或离心分离得到液相组分；再除去液相组分中的多糖及核酸类杂质；然后通过超滤膜分离，滤过液经减压浓缩和真空冷冻干燥后获得分子量小于10kDa的多肽组分；

（2）多肽组分用分子排阻层析柱分离，以pH 7.0~8.0的磷酸缓冲液为流动相，洗脱流速为0.3~1.0mL/min；

（3）收集分子排阻层析柱流出的目标组分，进一步采用阴离子交换柱分离，用0~2mol/L、pH 7.0~8.5的NaCl溶液梯度洗脱分离，收集目标组分后冷冻干燥，获得六肽。

3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述酶的加入量为干酵母粉质量的0.5%~2.5%。

4.根据权利要求2或3所述的制备方法，其特征在于，步骤（2）所述除去过滤或离心所得液相组分中的多糖及核酸类杂质是采用乙醇沉淀法，乙醇的加入量为液相组分的体积的2~6倍。

5.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述超滤膜分离选用截留分子量为5kDa~10kDa的超滤膜。

6.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述分子排阻层析柱流出的目标组分为对ACE的半抑制浓度最小的多肽组分；阴离子交换柱流出的所述目标组分为对ACE的半抑制浓度最小的多肽。

7.权利要求1所述的六肽的制备方法，其特征在于，按照固相合成法在羧基树脂上依次连接以芴甲氧羰酰基为保护基团的氨基酸，缩合剂为羟基苯并三唑；反应温度20~40℃，单个氨基酸的接肽反应时间为0.5~2h，脱保护剂为含哌啶的N,N-二甲基甲酰胺，脱保护时间为0.5h，获得六肽化合物粗品，再经C18柱分离纯化，冷冻干燥，制得六肽；

所述以芴甲氧羰酰基为保护基团的氨基酸为Fmoc-Ser、Fmoc-Gln、Fmoc-Gln、Fmoc-Thr、Fmoc-Pro和Fmoc-Thr。

8.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于，所述羧基树脂为Wang树脂。