[发明专利]内源性的非编码小RNAs及其应用

说明书

技术领域

本发明属于生物医药工程领域，涉及一种内源性的非编码小RNAs及其应用，具体涉及一种微小RNA(microRNA，miRNA)及其前体序列和它们在制备预防和/或治疗恶性肿瘤疾病的试剂盒中的应用。

背景技术

当前恶性肿瘤是全世界死亡率较高的疾病，且恶性肿瘤的发病率逐年增加，严重威胁着人类的健康。第三次全国死因调查结果表明，我国城乡居民恶性肿瘤死亡率属于世界较高水平，而且呈持续的增长趋势，恶性肿瘤已成为我国城市居民首位死因(25％)。近年来有关肿瘤发病机理及肿瘤防治的研究取得很大进展，但在全球范围内，恶性肿瘤的防治仍是当今生命科学研究领域的一个难点。

细胞凋亡在肿瘤发病机制中发挥重要作用，肿瘤细胞凋亡的抑制与肿瘤的发生发展具有密切的关系。许多参与凋亡调控的基因在肿瘤的发生发展中发挥重要作用，这些基因可以作为肿瘤诊断及治疗的作用靶点。因此，寻找肿瘤细胞中新的参与凋亡的蛋白因子、miRNA等及阐明其在肿瘤细胞凋亡中的作用机理具有极其重要的应用价值。

microRNA(miRNA)是一类长度在22nt左右的内源非编码小RNA，广泛存在于动物、植物、病毒等多种有机体中。它主要通过与靶基因的3′UTR的完全或不完全配对，降解靶标基因mRNA或抑制其翻译，从而参与调控机体发育、细胞凋亡、增殖及分化等生命活动，预测超过1/3的人类基因都是保守的miRNA靶基因。实验证据表明，miRNA可通过调控其靶标基因参与的信号通路，影响肿瘤的发生和发展，发挥着类似于癌基因或抑癌基因的功能。miRNA的发现为肿瘤发病机制的研究提供了新的思路，为肿瘤诊断和治疗提供了新的策略。

随着科技的发展和肿瘤细胞信号传导途经研究的不断深入，以生物靶分子为基础的肿瘤生物治疗成为研究抗肿瘤药物的热点。肿瘤的生物疗法以分子生物学、细胞生物学和分析免疫学为基础，与手术放疗化疗三大常规疗法作用相互补充，大幅提高肿瘤的治疗疗效。将生物技术与放疗化疗结合起来，引入促凋亡的分子可以逆转肿瘤细胞产生的耐药性，增强肿瘤细胞对抗肿瘤药物的敏感性，从而避免了传统的放疗化疗方法引起的耐药性和毒副作用的缺点，达到治疗肿瘤的效果。本领域迫切需要了解促肿瘤细胞凋亡相关的因子，将其作为药物治疗的靶分子应用于临床的治疗中，因此寻找与促肿瘤细胞凋亡相关的因子与放疗化疗结合治疗肿瘤疾病，具有广阔的前景。

发明内容

本发明的目的是提供一种新的具有促肿瘤细胞凋亡功能的微小RNA即miR-644，该miRNA为生物体内一段内源的miRNA，具有促进肿瘤细胞凋亡的功能，在肿瘤细胞模型和裸鼠荷瘤模型的实验中均增强了阿霉素对肿瘤细胞的治疗效果。

针对上述技术目的，本发明的技术方案如下：

一方面，本发明提供一种微小RNA在制备用于预防、治疗和/或预后评估恶性肿瘤的药物或试剂盒中的用途，其中所述微小RNA为miR-644及其前体序列。

优选地，所述miRNA-644的序列为包含下述SEQ ID NO：1所示的核苷酸序列的核苷酸或者其生物活性功能片段或变体：

5′-AGUGUGGCUUUCUUAGAGC-3′。

优选地，所述miRNA-644前体的序列为包含下述SEQ ID NO：3所示的核苷酸序列的核苷酸或者其生物活性功能的片段或变体：

5′-UUUUUUUUUAGUAUUUUUCCAUCAGUGUUCAUAAGGAA

UGUUGCUCUGUAGUUUUCUUAUAGUGUGGCUUUCUUAGAGCAAA

GAUGGUUCCCUA-3′。

优选地，所述miRNA-644的序列进行了硫代修饰、甲氧修饰或胆固醇修饰。

优选地，所述miRNA-644或其前体的序列通过转入已知表达载体构建含有miRNA-644或其前体序列的表达载体，并将构建的含有miRNA-644或其前体序列的表达载体转入病毒表达获得。

优选地，所述已知表达载体为pSilencer Adeno CMV1.0穿梭载体(pSilencer Adeno CMV1.0shuttle vector)，所述病毒为腺病毒。

另一方面，本发明提供了一种用于预防和/或治疗恶性肿瘤的药物组合物，其包含治疗有效量的上述miR-644及其前体序列和药学上可接受的病毒、载体或辅料，其中所述微小RNA为包含以下SEQ ID NO：1序列的核酸或者其生物活性功能片段或变体：5′-AGUGUGGCUUUCUUAGAGC-3′。