[发明专利]戊型肝炎病毒的病毒样颗粒的组装机制及其制备方法

权利要求书

1.制备戊型肝炎病毒(HEV)的病毒样颗粒(VLP)的方法，其包括步骤：在变性剂存在的条件下，通过添加盐使HEV衣壳蛋白或其变体或片段组装成VLP，其中所述HEV衣壳蛋白或其变体或片段具有组装成VLP的能力，

所述变性剂例如可以是尿素、脲、盐酸胍或其组合，优选尿素；

所述盐例如可以是NaCl、NH₄Cl、(NH₄)₂SO₄、Na₂SO₄或其组合，优选(NH₄)₂SO₄；优选地，所述盐的离子强度为至少0.9mol/kg，例如至少0.3M的(NH₄)₂SO₄；

所述HEV衣壳蛋白或其变体或片段例如可以是以包含体形式表达于大肠杆菌中的HEV衣壳蛋白或其变体或片段；

所述HEV衣壳蛋白的变体或片段例如可以是p239蛋白，优选地，所述p239蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示。

2.制备戊型肝炎病毒(HEV)的病毒样颗粒(VLP)的方法，其包括如下步骤：

1)提供具有组装成VLP的能力的HEV衣壳蛋白或其变体或片段；

2)将步骤1)的HEV衣壳蛋白或其变体或片段溶解于含变性剂的溶液中；

3)向步骤2)获得的溶液中添加盐，以使所述HEV衣壳蛋白或其变体或片段组装成VLP；

其中，

在步骤1)中，例如通过将其以包含体形式表达于大肠杆菌中来提供所述HEV衣壳蛋白或其变体或片段；

例如，所述HEV衣壳蛋白的变体或片段可以是p239蛋白，优选地，所述p239蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示；

在步骤2)中，所述变性剂例如可以是尿素、脲、盐酸胍或其组合，优选尿素；

在步骤3)中，所述盐例如可以是NaCl、NH₄Cl、(NH₄)₂SO₄、Na₂SO₄或其组合，优选(NH₄)₂SO₄；优选地，所述盐的离子强度为至少0.9mol/kg，例如至少0.3M的(NH₄)₂SO₄；

任选地，在进行步骤3)之前，对在含变性剂的溶液中的HEV衣壳蛋白或其变体或片段进行纯化，例如，通过阴离子交换层析和/或疏水相互作用层析进行纯化；

任选地，在步骤3)之后，去除溶液中的变性剂，例如通过将含有HEV VLP的溶液透析到PBS溶液中来去除变性剂。

3.控制HEV衣壳蛋白或其变体或片段组装成VLP的组装速度的方法，其包括步骤：控制包含HEV衣壳蛋白或其变体或片段的溶液的盐浓度和/或控制所述溶液的温度，其中所述HEV衣壳蛋白或其变体或片段具有组装成VLP的能力，

所述HEV衣壳蛋白或其变体或片段例如可以是以包含体形式表达于大肠杆菌中的HEV衣壳蛋白或其变体或片段；

所述HEV衣壳蛋白的变体或片段例如可以是p239蛋白，优选地，所述p239蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示；

所述溶液包含或不包含变性剂；

所述变性剂例如可以是尿素、脲、盐酸胍或其组合，优选尿素；

所述盐例如可以是NaCl、NH₄Cl、(NH₄)₂SO₄、Na₂SO₄或其组合，优选(NH₄)₂SO₄；

其中，当所述溶液的盐浓度升高和/或所述溶液的温度升高时，所述组装速度加快。