[发明专利]一种检测细胞凋亡信号通路的试剂及其PCR检测方法

说明书

技术领域

本发明属于分子生物学领域，尤其涉及一种检测细胞凋亡信号通路的试剂及其PCR检测方法。

背景技术

细胞凋亡本质上是一种由死亡信号诱发的受调节的细胞程序性死亡过程，是细胞生理性死亡的普遍形式。是机体在生理或病理条件下，启动自身内部机制，经过多途径的信号传递，结束其自身生命的过程。细胞凋亡具有特征性的形态学及生物化学改变。凋亡早期主要表现为胞质空泡，染色质浓缩并沿核膜排列；凋亡细胞与细胞外基质或周围细胞分离。随着凋亡过程的进展，胞质空泡与胞膜融合，导致膜发泡，随后空泡与细胞分离，引起水分丢失，细胞皱缩，同时染色质进行性固缩，并碎裂成块状结构，最后细胞也碎裂成凋亡小体。目前诱导肿瘤细胞的凋亡已经成为治疗肿瘤的一种关键手段。但是细胞凋亡具有复杂的信号途径，如何能从庞杂的细胞凋亡信号途径中，找出明确的凋亡信号途径从而开发肿瘤相关药物，以便于进一步诱导肿瘤细胞的凋亡，现在已经成为肿瘤药物研发领域的急需解决的重要问题。

发明内容

本发明针对现有技术中诱导肿瘤细胞凋亡遇到的困难，提供了一种检测细胞凋亡信号通路的试剂及其PCR检测方法，本发明将涉及细胞凋亡的信号分子集中在一个平板上，通过做一次实时荧光定量PCR反应，反应细胞的生存状态，探讨引起细胞凋亡的可能途径，为研究关键蛋白的凋亡信号通路提供最直接的证据。

为实现上述发明目的，本发明采用下述技术方案予以实现：

一种检测细胞凋亡信号通路的试剂，它包括以下引物：

（1）检测BAX基因的PCR反应引物，其引物序列如下：

5'-GGGTGGTTGGGTGAGACTC-3'；

5'-AGACACGTAAGGAAAACGCATTA-3'；

（2）检测ANGPTL4基因的PCR反应引物，其引物序列如下：

5'-GTCCACCGACCTCCCGTTA-3'；

5'-CCTCATGGTCTAGGTGCTTGT-3'；

（3）检测IL1A基因的的PCR反应引物，其引物序列如下：

5'-ATCATGTAAGCTATGGCCCACT-3'；

5'-CTTCCCGTTGGTTGCTACTAC-3'；

（4）检测MYBL2基因的的PCR反应引物，其引物序列如下：

5'-ATCGCCAAGATGTTGCCAGG-3'；

5'-GGACTCGCTCAAGAAGCCT-3'；

（5）检测PEA15基因的的PCR反应引物，其引物序列如下：

5'-CCTGACCTACTCACTATGGTGG-3'；

5'-GCTGCCGGATAATGTCTTTGTA-3'；

（6）检测PRKAA1基因的的PCR反应引物，其引物序列如下：

5'-GCGACAAGCCCACCTGATT-3'；

5'-TGTTTCAGCAACCAAGAATGGTA-3'；

（7）检测BIRC5基因的PCR反应引物，其引物序列如下：

5'-AGGACCACCGCATCTCTACAT-3'；

5'-AAGTCTGGCTCGTTCTCAGTG-3'；

（8）检测CASP1基因的PCR反应引物，其引物序列如下：

5'-TCCAATAATGGACAAGTCAAGCC-3'；

5'-GCTGTACCCCAGATTTTGTAGCA-3'；

（9）检测DAPK3基因的PCR反应引物，其引物序列如下：

5'-TCACTACCTGCACTCTAAGCG-3'；

5'-TTCCCCGCCTCGATCTTGT-3'；

（10）检测NUDT2基因的PCR反应引物，其引物序列如下：

5'-GCCTTGAGAGCATGTGGCTT-3'；

5'-ATGAATGCCATCTGATGCCTG-3'；

（11）检测内参GAPDH控制基因的PCR反应引物，其引物序列如下：

5'-TCATGGGTGTGAACCATGAGAA-3'；

5'-GGCATGGACTGTGGTCATGAG-3'。

本发明还提供了用所述检测试剂检测细胞凋亡信号通路的PCR检测方法，所述PCR检测方法为实时荧光定量PCR方法。