[发明专利]过表达RimL的大肠杆菌及其在制备N-乙酰化胸腺素α中的应用

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域，尤其涉及一种过表达RimL的大肠杆菌及其在制备N-乙酰化胸腺素α中的应用。

背景技术

蛋白和多肽的N-末端乙酰化修饰是真核细胞中普遍存在的一种修饰，50％以上的真核细胞胞浆蛋白都有这种修饰。初步的功能研究表明N-末端乙酰化可通过改变N-端的电荷性，封闭N端等方式，对许多蛋白和多肽的空间结构、配体识别、抗降解等特性产生重要影响。如小分子GTPaes-Arl3P蛋白的N-末端乙酰化修饰促进了其与膜受体Sys1p/hSys1的识别，并使其定位到膜上。胎儿血红蛋白的N-末端乙酰化可以使其四聚体的解聚能力提高30倍。胸腺素α1(thymosinα1，Tα1)的N-末端乙酰化对其在血浆中的稳定性具有重要作用。除了Tα1外，还有如黑色素细胞刺激素(Melanocyte-Stimulating Hormones，α-MSH)、胸腺素β4(Thymosin β4，Tβ4)等一批在临床上具有重要应用的多肽也需要N-末端乙酰化修饰。

与真核生物中的普遍存在现象明显不同的是，原核生物的N-末端乙酰化修饰非常罕见。在大肠杆菌内源蛋白中已知发生N-末端乙酰化修饰的只有核糖体亚基L7、S5、S18、延长因子EF-Tu和伴侣蛋白SecB等为数不多的几种蛋白。大肠杆菌中已经发现的参与蛋白和多肽的N-末端乙酰化修饰的乙酰基转移酶只有负责核糖体亚基S5乙酰化修饰的RimI，核糖体亚基S18乙酰化修饰的RimJ，和核糖体亚基L7乙酰化修饰的RimL。这些乙酰基转移酶有很强的底物专一性。除上述每个酶对应的特异性底物外，未知其能修饰大肠杆菌的其它蛋白或多肽。

胸腺素α是一族具有相同或相似的N-端序列的免疫调节多肽，它们包括胸腺素α原、胸腺素α1、胸腺素α11及其各种融合蛋白等。胸腺素α1和胸腺素α11是胸腺素α原在体内降解的产物，它们分别包括了胸腺素α原的N-端28和35个氨基酸。不同物种的胸腺素α具有很高的保守性。胸腺素α的氨基酸序列上某些位点存在多态性，如其N-端第13位氨基酸残基，有的是苏氨酸，有的是异亮氨酸，它们具有相同或相似的功能。

胸腺肽是一类动物胸腺中提取的包含各种胸腺素α及其它胸腺来源肽类的免疫制剂，已广泛用于病毒性肝炎、肿瘤等的治疗。但动物提取的胸腺肽存在成分复杂，纯度低，其中混有动物来源的污染物，易产生过敏反应等问题。化学合成的N-乙酰化胸腺素α1，是一种采用多肽化学合成方法制备的N-乙酰化胸腺素α1，此种方法获得的Tα1纯度高、活性高、没有明显的副反应，如SciClone公司的“日达仙”，已被包括我国在内的多个国家批准用于病毒性肝炎的治疗获作为免疫调节药物；但化学合成N-乙酰化胸腺素α1这样一个28个氨基酸的多肽，合成和纯化工艺复杂，得率较低，因此制品价格高，限制了该药的广泛应用。

发明内容

本发明的一个目的是提供一种重组菌。

本发明提供的重组菌，为如下1)或2)：

1)将RimL的编码基因和胸腺素α的编码基因导入宿主菌中得到的重组菌；所述宿主菌为基因组中含有RimL编码基因的宿主菌；

2)将胸腺素α的编码基因导入如下所述的重组菌中得到的重组菌；

所述RimL为如下(a)、(b)或(c)所示的蛋白：

(a)由序列表中序列2所示的氨基酸序列组成的蛋白质；

(b)将序列表中序列2所示的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且具有相同功能的蛋白；

(c)与a)或b)限定的DNA序列至少具有90％同源性且具有相同功能的蛋白；

所述胸腺素α为一种多肽或蛋白，其N末端的28个氨基酸残基与序列表中序列3的N末端的28个氨基酸相同或其N末端的28个氨基酸残基与序列表中序列3的N末端的28个氨基酸至少具有90％同源性。

所述一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加为10个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加。

1)所示的重组菌中，所述将RimL的编码基因和胸腺素α的编码基因导入宿主菌的方法包括如下步骤：

a)将所述RimL的编码基因通过重组载体2导入所述宿主菌，得到重组菌A；

b)将所述胸腺素α的编码基因通过重组载体1导入步骤a)得到的所述重组菌A，得到重组菌；